COS-1 SV40转化的非洲绿猴肾细胞系，上皮样，贴壁生长，表达 SV40 大 T 抗原，瞬时转染效率高，适用于病毒学研究、重组蛋白瞬时表达及基因功能分析。

来源与转化机制：该细胞系源自 1964 年分离的非洲绿猴肾原代细胞，通过转染 SV40 病毒早期区域基因获得永生化克隆。转化过程中，SV40 大 T 抗原基因整合入宿主基因组并稳定表达，该抗原可与 p53、Rb 等抑癌蛋白结合并使其失活，同时激活细胞周期调控通路，实现永生化。全基因组测序显示其染色体数目为 60（近二倍体），与原代肾上皮细胞遗传相似度＞95%，SV40 大 T 抗原表达阳性率达 100%（免疫荧光检测）。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多边形，胞核大而圆，细胞排列紧密呈单层；悬浮培养易脱落死亡，故以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 18-22 小时，适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基，传代 50 次内生长速率稳定（衰减＜10%），冻存复苏后存活率超 85%，群体倍增时间较原代肾细胞缩短 40%。

功能特征：核心优势在于 SV40 大 T 抗原介导的高效复制能力：该抗原可与含 SV40 复制起点（ori）的质粒结合，启动滚环复制，使外源基因拷贝数在转染后 48 小时内扩增至 10⁴-10⁵ copies/cell，瞬时表达效率较 HEK293 细胞高 2-3 倍。同时，其具备完整的蛋白加工系统，分泌型重组蛋白的糖基化修饰正确率达 90% 以上，且无内源性病毒污染（经 WHO 认证的无支原体、病毒检测报告）。

贴壁培养操作：

瞬时转染流程：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 5×10⁶个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 5 年，复苏后需传代 1 次再用于转染实验（确保大 T 抗原表达恢复）。

优势：瞬时转染效率高（＞80%），外源基因拷贝数扩增能力强；蛋白表达周期短（48-72 小时），适合快速实验验证；无内源性病毒污染，生物安全性高；对多种表达载体兼容性好，无需特殊筛选标记。

局限性：长期传代（＞60 次）易出现大 T 抗原表达下调（约 20%）；悬浮培养能力差，难以规模化生产；部分复杂膜蛋白的表达量较低（＜1mg/L）；存在成瘤性（裸鼠接种可形成肿瘤），操作需符合生物安全二级标准。