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MA104罗猴胎肾细胞系
产品型号:BY-1392
简要描述:

MA104罗猴胎肾细胞系,上皮样,贴壁生长,对轮状病毒、脊髓灰质炎病毒敏感,支持高效复制,适用于病毒分离、疫苗研发及抗病du药物筛选。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

MA104罗猴胎肾细胞系
MA104罗猴胎肾细胞系,MA104 细胞系是源自罗猴(恒河猴)胚胎肾脏组织的上皮细胞模型,因对轮状病毒、脊髓灰质炎病毒等具有高度敏感性,且能支持病毒高效复制,成为消化道病毒研究、疫苗生产及抗病du药物筛选的核心工具。其保留胚胎肾细胞的增殖活性与病毒受体特异性,为多种病毒的体外研究提供了稳定的实验平台。
一、细胞起源与生物学特性
  1. 来源与建立背景

MA104 源自 20 世纪 60 年代分离的罗猴胎肾组织,通过原代培养获得永生化细胞系(“MA" 代表原始分离实验室代号,“104" 为克隆编号)。该细胞系未经过病毒转化,保留正常胚胎肾细胞的生物学特征,核型为罗猴正常二倍体(2n=42),长期传代(<80 代)后核型畸变率<5%,遗传稳定性优于部分转化细胞系。
  1. 形态与生长特征

细胞呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多边形,排列紧密呈铺路石状,胞质丰富且含明显的颗粒结构。在 37℃、5% CO₂条件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,倍增时间约 28-36 小时,传代比例 1:4 至 1:6,每周换液 2-3 次以维持细胞密度在 3×10⁴-1×10⁵个 /cm²。细胞冻存复苏存活率超 90%,液氮保存 5 年后仍保持病毒敏感性,对轮状病毒的感染效率无显著下降。
  1. 病毒敏感性与功能特性

  • 受体表达:高表达轮状病毒受体(如整合素 α2β1、热休克蛋白 70)和脊髓灰质炎病毒受体(PVR),其中轮状病毒受体阳性率>95%(流式细胞术检测),为病毒吸附与入侵提供分子基础。

  • 病毒复制支持:对轮状病毒的感染效率达 90% 以上,感染后 48-72 小时出现典型细胞病变(CPE),表现为细胞圆缩、脱落,病毒滴度可达 10⁷-10⁸ PFU/mL;对脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型的支持能力与 FRhK-4 细胞相当,滴度可达 10⁶ TCID₅₀/mL。

  • 无致瘤性:裸鼠接种实验显示无肿瘤形成能力,生物安全性符合疫苗生产的细胞基质要求(WHO 标准)。

二、核心应用领域
  1. 轮状病毒研究与疫苗生产

  • 病毒分离与分型:MA104 是国ji公ren的轮状病毒分离 “金标准" 细胞系,临床粪便样本接种后分离效率达 92%,较 Vero 细胞高 30%,可通过 CPE 出现时间与形态差异区分 A 组(最常见致病型)与非 A 组轮状病毒。其分离的病毒株经传代后保持遗传稳定性,为轮状病毒基因型别监测提供标准化毒株。

  • 减毒活疫苗生产:因无致瘤性与高病毒产量,广泛用于轮状病毒减毒活疫苗的工业化生产。在微载体培养系统中,轮状病毒滴度可达 5×10⁷ PFU/mL,单批次 1000L 反应器可生产 1000 万剂疫苗,批间差异<10%,显著优于原代猴肾细胞工艺。疫苗中宿主细胞 DNA 残留量<10pg / 剂,符合 WHO 生物制品规范。

  1. 其他病毒研究与诊断

  • 脊髓灰质炎病毒检测:作为脊髓灰质炎病毒分离的备选细胞系,其对 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型野毒株的检出率均>90%,支持病毒蚀斑形成实验,可用于疫苗株与野毒株的鉴别诊断,是*脊髓灰质炎 eradication 计划(GPEI)的监测工具之一。

  • 肠道病毒快速诊断:对柯萨奇病毒 A 组、埃可病毒等肠道病毒也具有敏感性,可在 48 小时内通过 CPE 判断病毒存在,为手足口病、无菌性脑膜炎等传染病的病原学诊断提供快速检测手段,诊断符合率达 88%。

  1. 抗病du药物筛选与机制研究

  • 药物活性评估:基于其对轮状病毒的高敏感性,可构建高通量药物筛选模型。例如,通过检测硝唑尼特对轮状病毒衣壳蛋白 VP4 的抑制效果,测定其 EC₅₀=2.3μM,与动物实验结果一致性达 0.91,为抗轮状病du药物研发提供可靠数据。

  • 病毒入侵机制解析:利用 MA104 研究轮状病毒与宿主受体的相互作用,已发现整合素 α2β1 的 N 端结构域是病毒吸附的关键位点,为靶向受体的抗病du药物设计提供分子靶点。

三、培养与实验操作要点
  1. 基础培养方案

  • 培养基:MEM 培养基添加 10% 胎牛血清,pH 维持在 7.2-7.4,可加入非必需氨基酸提升细胞活力。

  • 传代流程:当细胞融合度达 80%-90% 时,弃旧培养基,PBS 洗涤 2 次,加入细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟至细胞脱落,加入含血清的培养基终止消化,按 1:5 比例接种至新培养瓶,避免过度融合导致病毒敏感性下降。

  • 冻存保护:取对数生长期细胞,用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 8×10⁵个 /mL,程序降温后液氮保存,复苏后传代 2 次再用于病毒实验(确保受体表达稳定)。

  1. 病毒培养与检测

  • 轮状病毒接种:细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%,接种前用无血清培养基洗涤 2 次,加入 100μL 系列稀释的病毒液,37℃吸附 1 小时,换含 2% 血清的维持液,72 小时后观察 CPE,通过蚀斑法测定病毒滴度。

  • 脊髓灰质炎病毒培养:按 MOI=0.1 接种病毒,吸附后换维持液,48 小时后收集上清,-80℃冻存,通过 RT-PCR 或中和实验鉴定病毒型别。

四、优势与局限性
  • 优势

  1. 轮状病毒敏感性突出:分离效率与病毒产量均居现有细胞系shou位,是轮状病毒研究的不可替代模型。

  1. 生物安全性高:无致瘤性与外源病毒污染风险,符合疫苗生产的严格标准。

  1. 操作简便:贴壁生长稳定,传代与冻存流程成熟,适合标准化实验室操作。

  • 局限性

  1. 病毒谱较窄:对呼吸道病毒、包膜病毒敏感性低,应用范围受限。

  1. 血清依赖度高:无血清培养基中细胞生长缓慢,病毒产量下降约 40%,增加工业化生产成本。

  1. 传代限制:传代>100 次后轮状病毒受体表达下降,需定期复苏早期冻存细胞。

五、研究意义与展望
MA104 细胞系的应用显著推动了轮状病毒疾病的防控:其支撑的轮状病毒疫苗已在* 100 多个国家接种,使 5 岁以下儿童轮状病毒腹泻死亡率下降 50%(WHO 数据);在基础研究中,其揭示了轮状病毒入侵的受体机制,为新型疫苗设计提供理论基础。当前,通过基因编辑技术(如 CRISPR-Cas9 过表达轮状病毒受体)可进一步提升其病毒产量,结合 3D 细胞培养技术有望模拟肠道上皮微环境,为轮状病毒与宿主相互作用研究提供更接近体内的模型。未来,MA104 仍将是轮状病毒研究与疫苗生产的核心工具,助力*儿童腹泻疾病的防控。

 以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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