PK15-B1猪肾传代细胞系，PK15-B1 为 PK15 衍生的猪肾传代细胞系，上皮样，贴壁生长，对猪圆环病毒等敏感性更高，适用于病毒分离、疫苗生产及抗病du药物高效筛选。

病毒受体高表达：高表达猪圆环病毒受体硫酸乙酰肝素（阳性率 98%）和猪细小病毒受体整合素 αvβ3（阳性率 96%），其硫酸乙酰肝素表达量是母系 PK15 细胞的 2.5 倍，整合素 αvβ3 表达量提升 40%，为病毒高效吸附与入侵提供分子基础；同时上皮特异性标志物细胞角蛋白 18（CK18）阳性率保持 97%，确保上皮功能完整性。

病毒复制支持能力：对猪圆环病毒 2 型的感染效率达 99%（母系 PK15 细胞为 65%），病毒复制周期缩短 12 小时，48 小时即可达到母系 72 小时的病毒滴度（10⁸ TCID₅₀/mL）；对猪细小病毒的支持能力也显著提升，核内包涵体形成率达 85%，较母系提高 30%，体现对 DNA 病毒的广谱高敏感性。

遗传稳定性：全基因组测序显示，PK15-B1 与母系 PK15 细胞的序列一致性达 99.8%，仅在 3 个病毒受体相关基因启动子区域存在甲基化差异，导致受体表达上调，确保遗传背景稳定的同时实现功能优化。

病毒分离与鉴定：作为猪圆环病毒分离的 “金标准" 细胞系，PK15-B1 从临床样本中的病毒分离率达 95%（母系 PK15 细胞仅 60%），且能在 3 天内观察到典型细胞病变（胞质内绿色荧光包涵体），显著缩短诊断周期。我国首ci分离的猪圆环病毒 3 型即依赖该细胞系完成纯化鉴定。

病毒复制机制解析：利用其高敏感性，发现猪圆环病毒 2 型衣壳蛋白（Cap）与硫酸乙酰肝素的结合亲和力较母系细胞提升 2 倍，且病毒在该细胞内的 DNA 复制效率提高 40%，为解析病毒复制调控机制提供关键证据。

疫苗生产效能提升：在猪圆环病毒灭活疫苗生产中，PK15-B1 细胞的病毒产量达 10⁸.⁸ PFU/mL，较母系 PK15 细胞提升 60%，单位体积培养基的病毒收获量增加 45%，显著降低生产成本；疫苗免疫仔猪后，中和抗体效价达 1:256，较母系细胞生产的疫苗提升 30%。

疫苗效力快速评价：作为疫苗批签发的标准检测细胞系，其病毒中和试验结果与仔猪攻毒保护率的一致性达 92%，较母系细胞提升 15%，且检测时间缩短 24 小时，被农业部列为猪圆环病毒疫苗效力检测的shou选细胞系。

药物筛选模型：基于其高效病毒复制能力，建立自动化高通量筛选体系，日均可检测 300 种化合物。筛选出的新型圆环病毒抑制剂可使病毒滴度下降 1000 倍，EC₅₀值较母系细胞检测结果降低 40%，显著提升筛选灵敏度。

作用机制研究：利用该细胞系发现某植物提取物可特异性抑制病毒 Cap 蛋白与硫酸乙酰肝素的结合，阻断率达 85%，为靶向受体的抗病du药物开发提供新方向。

培养基：MEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4；为增强病毒复制能力，可添加 5ng/mL 表皮生长因子（EGF），使病毒受体表达量再提升 20%。大规模生产可采用无血清培养基，病毒产量与含血清体系相当。

传代流程：当细胞融合度达 70% 时，消化处理后按 1:5 比例接种，离心速度 1000rpm，24 小时贴壁率超 95%，避免过度融合（＞80% 会导致病毒敏感性下降）。

冻存保护：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 2×10⁶个 /mL，程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，接种至预涂明胶的培养瓶，存活率可达 92%。

猪圆环病毒培养优化：细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时后换含 2% 血清的维持液，加入病毒液（MOI=0.01），37℃吸附 1 小时后换液，48 小时后通过间接免疫荧光检测病毒 Cap 蛋白，阳性率可达 98%，结果变异系数＜5%。

病毒滴度测定：采用 TCID₅₀法，将病毒液 10 倍系列稀释后接种 PK15-B1 细胞，72 小时观察细胞病变，其终点稀释度较母系 PK15 细胞高 2 个数量级，检测灵敏度显著提升。

优势：

局限性：