CHO-K1/CAF13中国仓鼠卵巢细胞系，上皮样，贴壁生长，稳定表达 CAF13 蛋白，遗传稳定，适用于该蛋白功能研究、相关通路分析及生物制药领域的探索。

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 细胞为亲本（CHO 细胞的经典亚株，源自中国仓鼠卵巢组织），通过慢病毒载体介导将 CAF13 基因导入细胞基因组，经 G418 抗性筛选及单克隆纯化获得均一细胞群体。“CAF13" 明确标识其表达的靶蛋白，确保细胞系功能的特异性与可追溯性。构建过程中采用 CMV 强启动子驱动 CAF13 基因表达，显著提升蛋白合成效率，经多轮筛选后获得表达稳定的单克隆细胞株。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长，细胞呈多边形，排列紧密，形态与亲本 CHO-K1 细胞一致，无明显形态变异。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 24-32 小时，可适应含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基，兼容无血清培养体系，传代 60 次以上仍能维持稳定的生长状态与形态特征，贴壁能力强，为长期实验与规模化培养提供保障。

表达特征：CAF13 蛋白主要定位于细胞质（部分亚型可定位于细胞核），表达量达 8-12μg/10⁶细胞 / 24 小时（通过 Western blot 定量），长期传代（＞50 代）后表达量波动＜8%，远低于普通瞬时转染系统的变异率。该蛋白保留天然构象与生物学活性，能与特异性配体或抗体结合，其翻译后修饰（如磷酸化、乙酰化）与体内天然蛋白一致，为功能研究奠定基础。

优势：CAF13 蛋白表达稳定，长期传代后功能无明显衰减，实验重复性优于瞬时表达系统；遗传背景清晰，与 CHO-K1 细胞高度同源，便于对比分析 CAF13 蛋白的特异性作用；培养适应性强，可通过悬浮驯化实现生物反应器规模化培养，满足大量蛋白制备需求；蛋白翻译后修饰接近天然状态，生物活性保留完整，适合功能研究与应用开发。

局限性：需持续维持抗性筛选压力（如 G418），增加培养成本；部分 CAF13 蛋白的细胞内定位可能受培养条件影响，需优化检测方法；与人类细胞相比，蛋白修饰存在细微差异，结果外推至人体需结合人源模型验证。

培养条件：基础培养基为含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基，添加 G418（400μg/mL）维持抗性筛选，同时加入谷an酰胺与非必需氨基酸促进细胞代谢。传代时控制融合度在 70%-80%，采用 0.25% yi酶 - EDTA 消化，避免过度消化导致细胞活性下降。悬浮培养可采用无血清培养基逐步驯化，最终细胞密度可达 2.5×10⁶个 /mL，蛋白表达量无明显降低。

蛋白检测与质控：通过 Western blot 验证 CAF13 蛋白分子量及表达量，免疫荧光检测其细胞内定位；定期进行支原体检测与 STR 鉴定，确保细胞纯度与遗传稳定性。冻存时使用含 10% DMSO 的wan全培养基，液氮保存，复苏后传代 2-3 次待状态稳定后再用于实验，保证结果可靠性。