PK15-cyclinA shRNA2猪肾上皮细胞系，PK15-cyclinA shRNA2 为 PK15 衍生细胞系，稳定沉默 cyclinA，上皮样贴壁生长，增殖受抑，适用于细胞周期调控、病毒复制关联研究及相关药物筛选。

细胞周期阻滞特征：流式细胞术分析显示，G₂/M 期细胞比例达 45%（母系 PK15 细胞为 15%），S 期比例下降至 10%（母系为 30%），呈现典型的 G₂/M 期阻滞；同时细胞周期蛋白 B1（cyclinB1）表达量代偿性提升 40%，而 p21 等抑癌蛋白表达无显著变化，证实阻滞的特异性。

增殖相关功能变化：细胞增殖标志物 Ki-67 阳性率降至 25%（母系为 80%），DNA 合成速率下降 60%（³H-TdR 掺入法检测）；但上皮特异性标志物细胞角蛋白 18（CK18）阳性率保持 95% 以上，确保上皮功能完整性不受干扰。

病毒受体保留情况：猪细小病毒受体整合素 αvβ3（阳性率 92%）、猪圆环病毒受体硫酸乙酰肝素（阳性率 90%）表达量与母系相当，确保病毒感染系统的稳定性，为研究病毒与细胞周期的关联提供可靠背景。

cyclinA 功能解析：通过该细胞系证实 cyclinA 在猪肾细胞 G₂/M 期转换中的关键作用，发现其沉默可导致细胞分裂相关蛋白 CDC25C 磷酸化水平下降 50%，纺锤体组装异常率达 35%（母系仅 5%），为阐明猪源细胞的周期调控网络提供直接证据。

周期检查点研究：在 DNA 损伤剂处理后，PK15-cyclinA shRNA2 细胞的 G₂期检查点激活效率提升 2 倍（γ-H2AX 表达量为母系的 3 倍），且修复周期延长 48 小时，揭示 cyclinA 在 DNA 损伤应答中的负调控作用。

DNA 病毒增殖依赖分析：利用其 G₂/M 期阻滞特性，发现猪细小病毒在该细胞系中的复制效率下降 60%（病毒滴度从母系的 10⁸ TCID₅₀/mL 降至 10⁷.² TCID₅₀/mL），且病毒 DNA 合成相关蛋白 NS1 表达量下降 50%，证实该病毒复制依赖 cyclinA 介导的细胞周期进程。

病毒劫持机制解析：对比研究显示，猪圆环病毒 2 型在该细胞系中复制效率仅下降 15%，其 Cap 蛋白可与 cyclinB1 结合实现部分功能代偿，揭示不同病毒对细胞周期调控的差异化依赖机制。

细胞周期药物筛选：建立基于 G₂/M 期阻滞表型的高通量筛选体系，日均可检测 200 种化合物。筛选出的新型 cyclinA 抑制剂可使母系 PK15 细胞 G₂/M 期比例提升至 40%，且对该细胞系无显著影响，证实其特异性。

抗病du药物研发：利用该细胞系发现某核苷类似物对猪细小病毒的抑制效果在 G₂/M 期阻滞背景下提升 3 倍（EC₅₀从 1.2μM 降至 0.4μM），为开发周期依赖性抗病du药物提供策略。

培养基：MEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4；为维持表型稳定，需避免使用含 EGF 等促增殖因子的培养基，以防 cyclinA 表达反弹。

传代流程：当细胞融合度达 60% 时，消化处理后按 1:2 比例接种（低于母系的 1:3-1:5），离心速度 1000rpm，24 小时贴壁率超 90%，避免过度融合（＞70% 会导致细胞凋亡率上升）。

冻存保护：采用含 10% DMSO 的wan全培养基，细胞密度 3×10⁶个 /mL（高于母系），程序降温至 - 80℃过夜后转入液氮，复苏时 37℃水浴 1 分钟，接种后 48 小时更换培养基以去除死细胞，存活率可达 85%。

细胞周期检测：收集对数期细胞，70% 乙醇固定后，PI 染色流式细胞术分析，G₂/M 期比例变异系数＜5%；或通过免疫荧光检测磷酸化组蛋白 H3（PH3）标记分裂期细胞，阳性率可达 40%（母系为 10%）。

病毒感染实验：细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 48 小时后接种猪细小病毒（MOI=0.1），72 小时后检测病毒滴度，结果需与母系 PK15 细胞同步对照，以排除非特异性影响。

优势：

局限性：