P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞系
P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞系源自 BALB/c 小鼠的浆细胞瘤，是杂交瘤技术中制备单克隆抗体的重要细胞模型。作为次黄piao呤 - 鸟piao呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT⁻）细胞，它无法自主合成嘌呤核苷酸，且不分泌抗体，这些特性使其成为与 B 淋巴细胞融合的理想伙伴，在单克隆抗体制备领域发挥着关键作用。
在显微镜下观察，该细胞呈典型的悬浮生长状态，形态以圆形和类圆形为主，宛如在培养基中悬浮的微小 “球体"。细胞直径约 14-18 微米，比普通淋巴细胞稍大；胞质丰富，因含有大量核糖体而呈现强嗜碱性，部分细胞内可见大小不一的空泡；细胞核大而圆，位于细胞中央，核质比约为 1:1，染色质疏松，核仁明显且数量较多（通常 2-3 个），体现出活跃的增殖能力。细胞的倍增时间约为 28-40 小时，当细胞密度达到 1.5×10⁶-2.5×10⁶个 / 毫升时需要进行传代，传代时无需yi酶消化，只需轻柔吹打使细胞分散均匀，按 1:3-1:5 的比例接种到新的培养基中，连续传代 40 次以上仍能保持稳定的生物学特性。
培养 P3X63Ag8.653 细胞需要营造适宜的生长环境。基础培养基通常选择 RPMI 1640，其中含有的谷an酰胺、丙酮酸等成分能够满足细胞高速代谢的需求；添加 10% 的热灭活胎牛血清（FBS），可为细胞提供生长所需的各种因子，血清中的白细胞介素 - 6（IL-6）等对维持细胞的增殖活性尤为重要。培养环境需严格控制在 37℃、5% CO₂的恒温培养箱中，pH 值稳定在 7.2-7.4 之间，可通过培养基中的酚红指示剂直观监测酸碱变化。需要特别注意的是，该细胞对血清的质量较为敏感，劣质血清会导致细胞生长缓慢、聚集成团，因此每批血清都要经过至少 3 代的培养验证，确保细胞存活率不低于 85%。
在杂交瘤技术中，P3X63Ag8.653 细胞系的 HGPRT⁻缺陷型特性是实现选择性筛选的核心。当该细胞与免疫小鼠的脾细胞融合后，混合体系中会出现三种细胞：未融合的脾细胞（在体外只能存活 3-4 天）、未融合的骨髓瘤细胞以及融合后的杂交瘤细胞。将混合细胞置于含次黄piao呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶的 HAT 选择培养基中培养时，由于氨基蝶呤阻断了嘌呤和嘧啶的从头合成途径，未融合的骨髓瘤细胞因 HGPRT 缺陷，无法利用次黄piao呤合成嘌呤，最终会因核苷酸匮乏而死亡；而杂交瘤细胞则获得了脾细胞的 HGPRT 基因，能够在 HAT 培养基中存活并增殖，这一筛选机制大大提高了杂交瘤细胞的获得效率。
在单克隆抗体制备过程中，该细胞系有助于提高阳性克隆的筛选效率。通过优化融合条件，如调整聚乙二醇（PEG）的浓度（常用 45% PEG 4000）、融合时间（约 1 分钟）以及脾细胞与骨髓瘤细胞的比例（通常为 8:1-12:1），可以将融合率从 10⁻⁴提升至 8×10⁻⁴左右。同时，其不分泌抗体的特点，避免了融合后的杂交瘤细胞产生混合抗体，保证了单克隆抗体的纯度和均一性，这一优势使其在众多骨髓瘤细胞系中占据一席之地。
在抗体相关研究中，P3X63Ag8.653 细胞系构建的杂交瘤能够稳定分泌特异性抗体，为抗体的功能研究提供了便利。例如，在抗新guan病毒单克隆抗体的研发中，利用该细胞系与免疫小鼠脾细胞融合得到的杂交瘤细胞，分泌的抗体可特异性结合病毒的刺突蛋白，为后续的抗体中和活性检测及机制研究奠定了基础。此外，该细胞系还可用于研究抗体的表达调控机制，通过检测不同培养条件下抗体的分泌量，探索影响抗体表达的因素，为提高单克隆抗体的产量提供参考。
在骨髓瘤疾病研究方面，该细胞系可模拟多发性骨髓瘤的部分病理特征。通过检测细胞分泌的细胞因子（如 IL-6、VEGF）和基质金属蛋白酶等，能够探究骨髓瘤细胞与骨髓微环境之间的相互作用。研究发现，当该细胞与骨髓基质细胞共培养时，IL-6 的分泌量会增加 2 倍以上，进而促进自身的增殖，形成一个 “自分泌 - 旁分泌" 的循环，这一机制为开发针对多发性骨髓瘤的治疗药物提供了重要的实验依据。
前沿研究中，P3X63Ag8.653 细胞系的应用范围不断扩大。借助 CRISPR 基因编辑技术，敲除细胞内与抗体合成相关的冗余基因，可构建更高效的融合细胞模型，提高杂交瘤细胞分泌抗体的效率；利用单细胞测序技术对融合后的杂交瘤细胞进行分析，能够深入了解抗体基因的表达模式，为筛选高亲和力的抗体提供新的思路和方法。
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