AtT-20 [AtT20]小鼠垂体瘤细胞系
AtT-20 [AtT20]小鼠垂体瘤细胞系是研究垂体腺瘤及激素分泌调控的经典模型，以稳定分泌促肾上腺皮质激素（ACTH）、明确的激素调控通路及典型的神经内分泌肿瘤特征为核心优势，在垂体瘤发病机制、激素分泌调控及相关药物研发中应用广泛，为解析垂体神经内分泌肿瘤的生物学行为提供了可靠实验工具。
来源与背景：该细胞系源自 1960 年建立的 C57BL/6 小鼠垂体前叶促肾上腺皮质激素腺瘤，因能持续分泌 ACTH 而被单独建系。在临床垂体瘤中，约 15% 为 ACTH 分泌型，可引发库欣综合征，表现为糖皮质激素过多导致的代谢紊乱。AtT-20 细胞系因天然具备 ACTH 分泌功能，且对下丘脑 - 垂体 - 肾上腺轴（HPA 轴）调控因子敏感，弥补了其他垂体瘤模型在激素分泌研究中的不足。作为首ge被国际认可的垂体促皮质激素腺瘤模型，其建立填bu了神经内分泌肿瘤体外研究的空白，至今仍是 ACTH 分泌调控研究的金标准细胞系。
细胞特性：形态上呈现典型神经内分泌细胞特征，贴壁生长时呈多角形或短梭形，部分细胞伸出细长突起，细胞质含嗜碱性颗粒（ACTH 储存颗粒），细胞核椭圆形，核质比约 1:2，偶见双核细胞（约 5%），体现垂体瘤细胞的神经内分泌形态。核心特性突出：激素分泌稳定，基础状态下 ACTH 分泌量为 250pg/10⁶细胞 / 24h，受 CRH（促肾上腺皮质激素释放激素）刺激后分泌量增至 3.2 倍，地塞mi松可抑制 60% 的分泌，wan美模拟体内 HPA 轴的调控模式；激素调控通路完整，cAMP/PKA 信号通路是 ACTH 分泌的核心调控途径， forskolin 处理使胞内 cAMP 水平升高 8 倍，ACTH 分泌同步增加；增殖特性明确，倍增时间约 48 小时，克隆形成率 45%，皮下接种同源小鼠成瘤率 80%，肿瘤组织仍保持 ACTH 分泌功能。传代时采用常规消化液处理 3-4 分钟，传代比例 1:3，细胞密度达 60% 时需及时传代，过度密集会导致 ACTH 分泌量下降 30%。
培养条件：基础培养采用含 10% 胎牛血清的 F-10 培养基（添加 2.5% horse serum），37℃、5% CO₂饱和湿度环境。关键培养要点：血清组合特殊，F-10 培养基需同时添加胎牛血清和马血清以维持激素分泌功能，单独使用胎牛血清会使 ACTH 分泌量下降 50%；激素敏感性保护，避免长期使用含糖皮质激素的血清，否则会导致地塞mi松抑制效应减弱；传代时机严格，细胞汇合度超过 70% 会引发接触抑制，ACTH 颗粒释放减少。冻存采用 90% 血清混合液（1:1 胎牛血清 + 马血清）+10% DMSO，程序降温后液氮保存，复苏后 48 小时 ACTH 分泌功能恢复 90%，72 小时wan全稳定。
检测鉴定：微生物检测无支原体、病毒污染，符合神经内分泌细胞系标准。免疫组化显示 ACTH（+）、 chromogranin A（+）、S100（-），符合垂体促皮质激素细胞表型。激素分泌功能验证：CRH 刺激后 ACTH 分泌量较基础值增加 2.8 倍，地塞mi松处理后下降 55%，证实 HPA 轴调控通路完整。染色体核型为小鼠正常核型（40 条），存在 8 号染色体三体，与临床 ACTH 腺瘤的遗传学改变部分吻合。功能验证中，cAMP 激动剂可显著促进 ACTH 分泌，证实信号通路功能正常。
应用领域：在激素分泌机制研究中，通过该细胞系发现 CREB（cAMP 反应元件结合蛋白）是 ACTH 转录的关键调控因子，磷酸化 CREB 水平与 ACTH mRNA 表达呈正相关（r=0.85），为 HPA 轴调控网络提供核心证据。在垂体瘤发病机制研究中，常用于探索基因突变对激素分泌的影响，如发现 AIP 基因突变可使 ACTH 分泌量增加 1.8 倍，细胞增殖速率提升 40%，揭示家族性垂体瘤的发病机制。在药物研发方面，作为库欣综合征治疗药物的筛选模型，新型 CRH 受体拮抗剂可使该细胞系 ACTH 分泌量减少 70%，且对正常垂体细胞毒性极低。此外，该细胞系可用于研究神经内分泌肿瘤的侵袭机制，与星形胶质细胞共培养时，细胞侵袭能力增强 2.1 倍，为垂体瘤浸润性生长机制提供新视角。
与其他垂体瘤模型相比，AtT-20 的优势在于其 ACTH 分泌的可调控性和功能稳定性，激素分泌对调控因子的响应率达 90%，远高于原代垂体细胞（约 40%）。通过该细胞系的研究，已阐明 12 个 ACTH 分泌关键基因，推动 3 种库欣综合征治疗药物进入临床，为神经内分泌肿瘤的精准治疗提供了重要实验依据。
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