WEHI 231小鼠B淋巴细胞系
WEHI 231小鼠B淋巴细胞系源自 BALB/c 小鼠的 B 细胞淋巴瘤，是保留未成熟 B 细胞表型和高凋亡敏感性的经典模型，在 B 细胞分化、抗体生成调控及凋亡机制研究中具有不可替代的价值，尤其因对 B 细胞受体（BCR）信号的du特反应性，成为解析 B 细胞耐受与活化平衡的关键工具。
该细胞系呈现典型的未成熟 B 细胞形态与表型特征。显微镜下，细胞呈圆形或类圆形，以悬浮生长为主，偶见松散聚集体（直径＜100μm），单个细胞直径约 8-10μm，核质比高（约 0.7），细胞核呈圆形，染色质呈粗块状，可见 1-2 个核仁，核分裂象每 10 个高倍视野 5-6 个，胞质少而嗜碱性，可见少量嗜天青颗粒。电镜下可见胞质内富含游离核糖体，线粒体呈圆形或短杆状，符合淋巴细胞的超微结构特点。免疫表型分析显示，细胞高表达 B 细胞标志物 CD19（阳性率 98%）、CD20（阳性率 95%）和 IgM（膜结合型，阳性率 90%），低表达 CD21（阳性率 30%）和 MHCⅡ 类分子（I-Aⁿ，阳性率 40%），不表达 CD3（T 细胞标志物）和 Gr-1（粒细胞标志物），证实其未成熟 B 细胞特性，与骨髓中过渡期 B 细胞表型高度相似。
体外培养体系中，WEHI 231 细胞展现出du特的增殖与凋亡特性。最适培养条件为含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基（添加 50μM 2 - 巯基乙醇），在 37℃、5% CO₂环境下，传代周期约 48 小时，倍增时间约 36 小时，显著快于正常 B 细胞。其核心特征是对 BCR 交联诱导的凋亡高度敏感：经抗 IgM 抗体处理后，6 小时出现明显凋亡形态（染色质凝聚、细胞膜皱缩），24 小时凋亡率达 70%，而成熟 B 细胞系仅 15%，这种特性模拟了未成熟 B 细胞在接触自身抗原时的阴性选择过程。细胞在无血清培养基中 48 小时凋亡率达 80%，添加 IL-4 可使凋亡率降至 30%，证实细胞因子对其存活的调控作用，与体内 B 细胞发育依赖细胞因子微环境的特点一致。软琼脂克隆形成率约 20%，连续传代 40 次内，IgM⁺表型及凋亡敏感性无明显改变，冻存复苏存活率超 90%，复苏后 24 小时需更换培养基去除死细胞。
BCR 信号通路研究揭示其du特的调控模式。Western blot 分析显示，基础状态下细胞内 ERK 磷酸化水平较低，BCR 交联后 5 分钟 p-ERK 水平升高 6 倍，但持续时间短（30 分钟后下降至基础水平的 2 倍），与成熟 B 细胞的持续激活模式不同。下游钙信号通路表现为短暂 Ca²⁺内流（峰值在 2 分钟，10 分钟恢复基线），而成熟 B 细胞 Ca²⁺浓度可维持 30 分钟以上。这种信号特征与细胞内 SHIP1 磷酸酶的高表达相关（是成熟 B 细胞的 4 倍），SHIP1 可快速终止 PI3K/Akt 通路激活（p-Akt 在 15 分钟降至基础水平），导致抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达不升高，最终引发凋亡。敲除 SHIP1 后，BCR 诱导的凋亡率下降至 25%，证实其在凋亡调控中的核心作用。
凋亡机制研究中，WEHI 231 细胞是解析线粒体依赖途径的理想模型。抗 IgM 处理后，细胞se素 c 从线粒体释放至胞质的量在 6 小时增加 5 倍，caspase-9 和 caspase-3 活性分别升高 8 倍和 10 倍，而 caspase-8 活性无明显变化，证实其凋亡主要依赖内源性途径。Bax 蛋白在处理后发生构象改变并向线粒体聚集（线粒体 Bax 含量增加 4 倍），Bcl-2/Bax 比值从 1.2 降至 0.3，这种平衡失调是线粒体膜电位崩溃的关键原因（JC-1 染色显示膜电位下降 60%）。与其他凋亡模型相比，其凋亡过程不依赖死亡受体激活，信号通路更单纯，适合研究线粒体通透性转换的调控机制。
在 B 细胞耐受研究中，该细胞系模拟了自身反应性 B 细胞的清除过程。当用抗 IgM 抗体持续刺激时，细胞不仅发生凋亡，还表现出受体编辑现象：免疫球蛋白轻链基因 VJ 重组相关的 RAG1/2 表达上调 3 倍，新的轻链基因重排使部分细胞（约 10%）膜 IgM 表达消失，转而表达 IgG，这种表型转换与骨髓中自身反应性 B 细胞的受体编辑机制一致。共培养实验显示，树突状细胞分泌的 IL-10 可抑制受体编辑（RAG1/2 表达下降 50%），促进凋亡，而 T 细胞来源的 CD40L 可逆转这一过程（凋亡率下降至 20%），证实免疫微环境对 B 细胞耐受的调控作用。
药物筛选应用中，WEHI 231 细胞被用于评估 B 细胞相关疾病的治疗药物。基于其对 BCR 诱导凋亡的敏感性，可筛选调控 B 细胞存活的化合物，某新型 PI3Kδ 抑制剂处理后，BCR 诱导的凋亡率从 70% 提升至 90%，同时抑制细胞增殖（IC50 约 0.5μM），体内实验显示该药物可减少小鼠脾脏 B 细胞数量 30%，为 B 细胞淋巴瘤治疗提供了候选分子。其对糖皮质激素的敏感性较低（地塞mi松 IC50 1μM），而对钙调磷酸酶抑制剂敏感（环bao素 A IC50 0.1μM），这种差异反应性可用于区分药物作用靶点。
抗体生成研究中，该细胞系展现出du特的分泌特性。虽然细胞主要表达膜结合型 IgM，但经 LPS 和 IL-4 联合刺激后，5% 的细胞可分泌 IgM（ELISA 检测浓度达 50ng/mL・24h），同时发生部分分化（CD23 表达上调至 60%），但无法分化为浆细胞（不表达 CD138），证实其未成熟状态限制了终末分化。基因表达谱分析显示，BLIMP1（浆细胞分化关键转录因子）表达量仅为成熟 B 细胞的 1/5，过表达 BLIMP1 可使 IgM 分泌量增加 3 倍，说明转录水平调控是其分泌功能受限的主要原因。
在免疫调节研究中，WEHI 231 细胞与 T 细胞的相互作用为解析 B-T 细胞协作提供了模型。与 CD4⁺T 细胞共培养时，细胞可通过 CD40-CD40L 相互作用获得存活信号（凋亡率下降 40%），同时上调 CD80/CD86 表达（分别增加 3 倍和 2 倍），增强抗原提呈能力。T 细胞分泌的 IL-21 可进一步促进其增殖（增殖率增加 50%），这种协同效应依赖完整的 T 细胞受体信号，阻断 TCR 可使上述效应消失，模拟了体内 B 细胞依赖 T 细胞辅助的活化过程。
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