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首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1375Vero IgCD4猴肾细胞系

Vero IgCD4猴肾细胞系
产品型号:BY-1375
简要描述:

Vero IgCD4猴肾细胞系,上皮样,贴壁生长,稳定表达 IgCD4 受体,对 HIV 等病毒敏感性高,适用于病毒感染机制研究、抗病du药物筛选及疫苗评价。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

Vero IgCD4猴肾细胞系
Vero IgCD4猴肾细胞系,Vero IgCD4 细胞系是 Vero 细胞家族的基因工程衍生株,通过稳定表达 IgCD4 融合受体(IgG Fc 段与 CD4 胞外域的嵌合体),显著提升对 CD4 依赖型病毒的敏感性,成为 HIV 等逆转录病毒研究、抗病du药物筛选及疫苗评价的特色模型。其保留 Vero 细胞的上皮样特征与培养优势,同时因功能性受体的持续表达,为病毒入侵机制研究提供了精准靶向的实验平台。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与构建机制:该细胞系源自 Vero 亲本细胞,通过慢病毒介导的基因转染将 IgCD4 表达 cassette 整合入基因组,经嘌呤霉素筛选获得稳定克隆。IgCD4 融合受体的设计使 CD4 胞外域结合病毒 gp120 的亲和力较天然 CD4 提升 2 倍,且 Fc 段增强受体在细胞膜的锚定稳定性(流式检测显示受体阳性率>95%)。全基因组测序证实其染色体数目为 60(近二倍体),与 Vero 亲本遗传相似度>98%,IgCD4 基因整合位点稳定(传代 50 次无漂移)。

  • 形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多角形,胞核居中,细胞排列较 Vero E6 更疏松;悬浮培养适应性差,以贴壁生长为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 30-34 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,传代 50 次以上生长速率衰减<12%,冻存复苏后存活率超 85%,群体倍增时间较普通 Vero 细胞延长约 10%(因外源蛋白表达负荷)。

  • 功能特征:核心优势在于病毒识别的特异性与高效性:IgCD4 受体可特异性结合 HIV-1、SIV 等病毒的包膜蛋白 gp120,介导病毒膜融合效率较普通 Vero 细胞提升 10-15 倍,HIV-1 感染后 48 小时病毒滴度可达 10⁶-10⁷ TCID₅₀/mL(p24 抗原检测)。同时,其保留完整的病毒复制支持系统,可观察到从入侵、逆转录到子代病毒释放的完整周期,且无内源性逆转录病毒污染(经 RT-PCR 验证)。

二、核心应用领域
  1. CD4 依赖型病毒机制研究

该细胞系是解析 HIV 入侵过程的理想模型。通过荧光标记 IgCD4 受体,可直接观察病毒与受体结合后的内吞路径(共聚焦显示 80% 病毒颗粒在 30 分钟内进入早期内体);在 gp120 突变体研究中,其能精准区分不同亚型病毒对受体的结合偏好(如 HIV-1 B 亚型较 C 亚型结合效率高 30%),为病毒嗜性分析提供量化依据。此外,其可用于共受体(如 CCR5、CXCR4)协同作用研究,通过敲除实验证实 IgCD4 介导的感染对共受体依赖性降低 40%,揭示融合受体的功能代偿机制。
  1. 抗病du药物筛选与评价

因病毒感染效率高,该细胞系显著提升抗 HIV 药物的筛选灵敏度。在 Entry 抑制剂筛选中,马拉维若(CCR5 拮抗剂)的 EC₅₀测定值为 0.23nM,较普通 Vero 细胞(1.5nM)更接近临床数据;在中和抗体检测中,其可通过 TCID₅₀抑制实验量化 HIV 疫苗诱导血清的中和效价(ID₅₀),检测下限低至 1:1280,较传统 PBMC 模型操作更简便。基于其建立的高通量筛选体系,日均可完成 384 孔板的药物测试,阳性化合物验证率达 88%。
  1. 疫苗免疫原性评估

在 HIV 疫苗研发中,该细胞系可模拟病毒入侵的初始阶段,评估候选疫苗诱导的阻断性抗体活性。例如,对重组 gp120 疫苗免疫血清的检测显示,其中和效价与灵长类动物攻毒保护率的相关性达 0.82(高于 ELISA 方法的 0.65);在 DNA 疫苗评价中,其能反映疫苗诱导的细胞免疫对病毒复制的抑制效应(通过 IFN-γ ELISPOT 与病毒滴度的关联性分析),为疫苗效力验证提供多功能平台。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作

  1. 复苏:冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM+10% 胎牛血清 + 2μg/mL 嘌呤霉素)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 瓶,37℃、5% CO₂培养,24 小时贴壁率超 85%。

  1. 换液:接种 48 小时后首ci换液(含嘌呤霉素维持筛选压力),此后每 3 天换液一次,维持细胞密度在 2×10⁴-8×10⁴个 /cm²(密度过高导致受体表达下调)。

  1. 传代:融合度达 70% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟,镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止,按 1:4 比例传代,每 10 代检测一次 IgCD4 表达率(需>90%)。

  • 病毒感染实验流程

  1. 细胞准备:以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 60%-70%,感染前用无血清培养基洗涤 2 次。

  1. 病毒接种:加入含 HIV-1 的病毒液(MOI=0.1),37℃吸附 2 小时,吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液(不含嘌呤霉素)。

  1. 检测时机:感染后 48-72 小时通过 p24 ELISA 或 GFP 荧光(针对报告病毒)定量病毒复制,较普通 Vero 细胞提前 12 小时出现阳性信号。

  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,冻存液(70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO+2μg/mL 嘌呤霉素)重悬至 6×10⁶个 /mL,分装冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮,保存期超 5 年,复苏后需传代 1 次并检测受体表达(确保功能稳定)。

四、优势与局限性
  • 优势:IgCD4 受体表达稳定(传代 50 次阳性率>90%),对 CD4 依赖型病毒感染效率高(较普通 Vero 提升 10 倍以上);可量化分析病毒 - 受体相互作用,实验重复性好(CV<8%);保留 Vero 细胞的培养优势,易于规模化操作;适用于多种 CD4 依赖型病毒研究(HIV、SIV、HTLV 等)。

  • 局限性:嘌呤霉素长期筛选可能诱导代谢压力(需定期无药培养缓解);对非 CD4 依赖型病毒(如冠状病毒)敏感性低;IgCD4 受体可能改变病毒自然入侵路径(需结合原代细胞验证);高 MOI 感染时易出现细胞融合假象(需通过单轮感染实验排除)。

五、研究意义
Vero IgCD4 细胞系的构建为 CD4 依赖型病毒研究提供了精准化工具,其融合受体的设计突破了天然细胞对 HIV 敏感性不足的局限。在基础研究中,其助力阐明病毒受体结合的结构基础与构象变化;在应用领域,其加速了抗 HIV 药物与疫苗的研发进程,尤其在中和抗体评估与 Entry 抑制剂筛选中展现du特jia值,是连接分子机制研究与临床转化的重要桥梁,为逆转录病毒疾病的防控提供了关键实验支撑。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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