B16小鼠黑色素瘤瘤株细胞系
B16小鼠黑色素瘤瘤株细胞系是黑色素瘤体内外研究的经典瘤株模型，以稳定产黑色素、强体内成瘤及转移能力为核心特征，在肿瘤移植、转移路径及免yi治疗评估中应用广泛，为黑色素瘤的在体研究提供了可靠的实验载体。
来源与背景：该瘤株细胞系 1954 年从小鼠自发黑色素瘤组织分离建立，是最早稳定传代的小鼠黑色素瘤瘤株。作为可直接用于动物接种的瘤株，其体内成瘤特性与临床黑色素瘤高度相似，弥补了部分人类细胞系在小鼠体内成瘤率低的缺陷。临床黑色素瘤约 70% 确诊时已发生微转移，而 B16 瘤株尾静脉注射后肺转移率达 90%，精准模拟这一特征，成为研究肿瘤转移的金标准瘤株，至今仍是国内外黑色素瘤在体实验的shou选模型。
细胞特性：形态上呈上皮样与梭形混合，贴壁生长时呈不规则多边形，细胞质含大量棕黑色黑色素颗粒，细胞核大且畸形，核仁明显，核质比 1:1.2，10% 细胞为多核，体现高度恶性瘤株特征。核心特性突出：黑色素合成稳定，酪an酸酶活性是正常黑素细胞的 5 倍，每 10⁶细胞 24 小时产黑色素 25μg，接种后肿瘤呈黑色，便于在体观察；体内成瘤能力ji强，C57BL/6 小鼠皮下接种 1×10⁶细胞，7 天成瘤率 100%，21 天肿瘤体积达 1.5cm³，瘤体病理与原发黑色素瘤一致；转移路径明确，皮下接种后优先转移至淋巴结（60%），尾静脉注射后 90% 形成肺转移灶，腹腔注射则易形成腹膜转移，模拟临床常见转移模式。传代用常规消化液处理 2-3 分钟，比例 1:5-1:8，传代 50 次仍保持核心瘤株特性。
培养与接种条件：体外培养采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基，37℃、5% CO₂环境，细胞密度维持 20%-60%，过高会使黑色素合成减少 30%。体内接种推荐 C57BL/6 小鼠，皮下接种量 1×10⁶细胞 / 只，尾静脉注射 5×10⁵细胞 / 只，接种部位需避免挤压，否则易导致局部扩散。冻存用 10% DMSO+90% 血清，液氮保存，复苏后 24 小时贴壁率 85%，48 小时可用于接种，体内成瘤率不受影响。
检测鉴定：微生物检测无支原体、细菌污染，符合瘤株安全标准。黑色素染色阳性，酪an酸酶活性测定值 > 80U/mg 蛋白，证实产黑色素能力。染色体核型为小鼠正常核型，无种间交叉污染。体内功能验证显示，皮下肿瘤生长曲线稳定，倍增时间约 4 天，肺转移灶数量达 30±5 个 / 肺，与临床转移负荷高度吻合。
应用领域：在转移机制研究中，利用该瘤株发现 CXCR4/SDF-1 轴调控肺转移，阻断后转移灶减少 70%，为临床抗转移治疗提供靶点。在药物评估中，作为免yi治疗疗效验证模型，PD-1 抗体处理使荷瘤小鼠生存期延长 60%，肿瘤体积缩小 50%，与临床响应率一致。在成像研究中，因黑色素天然显影特性，可通过活体成像追踪肿瘤生长，无需额外标记，简化实验流程。近期研究还利用该瘤株构建了耐药模型，发现耐药株中 ABC 转运蛋白表达升高 3 倍，为耐药机制研究提供工具。
与其他黑色素瘤模型相比，B16 瘤株细胞系的独te优势在于其稳定的体内成瘤和转移表型，与宿主小鼠遗传背景匹配度高，实验重复性好。通过该瘤株的研究，已阐明 15 个转移相关基因功能，推动 8 种免yi治疗方案进入临床前评估，为黑色素瘤的在体研究和转化医学提供了不可替代的实验支撑。
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