ME小鼠黑色素瘤瘤株细胞系
ME小鼠黑色素瘤瘤株细胞系源自 C57BL/6 小鼠的自发性皮肤黑色素瘤，是保留黑素细胞恶性转化特征和强血行转移能力的经典肿瘤模型，在黑色素瘤的远处转移机制、色素合成调控及靶向治疗研究中具有重要价值，为解析黑色素瘤的侵袭转移规律提供了理想工具。
该细胞系呈现典型的黑色素瘤细胞形态与表型特征。显微镜下，细胞呈梭形或多边形，贴壁生长时排列呈不规则漩涡状或片状，部分区域可见色素沉着，模拟黑素细胞的分化特征。细胞核呈圆形或不规则形，核质比高，染色质呈粗颗粒状，可见 2-3 个明显核仁，核分裂象多见（每 10 个高倍视野 6-8 个），胞质丰富，呈嗜酸性，部分细胞胞质内可见棕黑色黑素颗粒，电镜下可见黑素小体，从 Ⅰ 期到 Ⅳ 期均有分布，符合黑色素瘤细胞的超微结构特点。免疫表型分析显示，细胞高表达黑素细胞特异性标志物 HMB45 和 Melan-A，流式细胞术检测阳性率分别达 90% 和 85%，同时表达肿瘤增殖抗原 Ki-67（阳性率 75%），而角质形成细胞标志物 CK10 表达阴性，证实其黑素细胞来源特性。
体外培养体系中，ME 细胞展现出旺盛的增殖能力与强侵袭潜能。最适培养条件为含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基，在 37℃、5% CO₂环境下，传代周期约 48 小时，对数生长期细胞活力达 95% 以上，倍增时间约 36 小时。其显著特点是血行转移能力突出，Transwell 侵袭实验中，穿透血管内皮细胞单层的数量是其他黑色素瘤细胞系的 1.5 倍，这种强侵袭性与其高表达基质金属蛋白酶 - 2（MMP-2）和 MMP-9 相关，酶活性分别是正常黑素细胞的 4 倍和 5 倍，可高效降解血管基底膜的 Ⅳ 型胶原。软琼脂克隆形成率达 40%，克隆形态呈不规则形，边缘有伪足样突起，部分克隆可见明显色素沉着，连续传代 50 次后，HMB45 表达及转移能力无明显衰减，冻存复苏存活率超 90%。
在动物模型中，ME 细胞的成瘤与转移模式ji具特点。接种 1×10⁶个细胞至 C57BL/6 小鼠皮下，7 天形成实体瘤，14 天出现局部侵袭，21 天肺转移率达 70%（肝转移率 50%），模拟人类黑色素瘤的血行转移偏好。病理切片显示肿瘤组织内可见大量含黑素颗粒的瘤细胞，呈巢状或弥漫性分布，免疫组化可见 HMB45 阳性细胞，肺转移灶内保留原发灶的色素合成能力。荧光标记追踪证实，细胞通过外周血循环定植于肺脏，高表达血管内皮细胞黏附分子 CD44v6，黏附率达 55%，CD44v6 抗体处理可使肺转移率下降 60%。
发病机制研究揭示其du特的分子异常。基因测序显示，细胞存在 BRAF 基因第 600 密码子突变（V600E）和 NRAS 基因扩增，导致 MAPK 通路与 PI3K/Akt 通路异常激活，Western blot 检测显示磷酸化 MEK（p-MEK）和磷酸化 Akt（p-Akt）水平分别是正常黑素细胞的 7 倍和 6 倍，双通路抑制剂联合处理可使细胞增殖率下降 80%，显著优于单通路抑制。与其他黑色素瘤细胞系相比，其小眼畸形相关转录因子（MITF）表达上调 3 倍，该因子可调控酪an酸酶家族基因表达，使细胞保持较强的色素合成能力，MITF 沉默后黑素颗粒生成减少 60%。
转移机制方面，ME 细胞的血行转移涉及多重调控。除 CD44v6 介导的血管黏附外，细胞高表达趋化因子受体 CXCR4，可响应肺组织高浓度的 CXCL12，迁移能力是 CXCR4 阴性细胞的 2.2 倍，CXCR4 拮抗剂处理可使肺转移灶数量减少 55%。基因芯片分析显示，转移灶细胞中与上皮间质转化（EMT）相关的 Snail 和 Twist 表达上调，E - 钙粘蛋白表达下降 50%，使细胞更易脱离原发灶进入血液循环，Snail 沉默后转移率下降 45%。
在药物筛选应用中，ME 细胞是评估黑色素瘤靶向药物的有效模型。基于其 BRAF V600E 突变特性，对 BRAF 抑制剂敏感，半数抑制浓度（IC50）约 0.5μM，药物处理后细胞 G1 期比例增加 45%，凋亡率上升 40%。体内实验显示，BRAF 抑制剂口服可使 C57BL/6 小鼠皮下肿瘤体积缩小 75%，肺转移率从 70% 降至 25%，疗效显著。其色素合成特性使其成为靶向黑素细胞药物的理想模型，某新型酪an酸酶抑制剂可减少黑素生成，同时抑制细胞增殖，使体外杀伤率达 70%。
在肿瘤微环境研究中，ME 细胞与肿瘤相关成纤维细胞（CAF）的相互作用为解析转移机制提供了线索。共培养实验显示，CAF 分泌的肝细胞生长因子（HGF）可激活肿瘤细胞的 c-Met 通路，使 MMP-2 表达上调 3 倍，侵袭能力增强 60%，HGF 中和抗体可阻断这种促进作用。在缺氧微环境（1% O₂）中，细胞 HIF-1α 表达上调，诱导血管内皮生长因子（VEGF）分泌增加，使肿瘤内微血管密度增加 2 倍，VEGF 抗体处理可抑制肿瘤生长及转移。
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