技术文章
TECHNICAL ARTICLES详细介绍
构建背景:CIAPIN1 是调控细胞存活与应激响应的关键因子,该细胞系通过慢病毒载体介导将人 CIAPIN1 基因导入 BHK-21 细胞(叙利亚仓鼠肾上皮细胞),经嘌呤霉素抗性筛选及单克隆纯化获得高表达株,“CIAPIN1+" 代表稳定过表达该基因的细胞群体,确保蛋白表达的均一性与稳定性。
形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长,细胞呈多边形或短梭形,排列紧密,形态与亲本 BHK-21 细胞一致。在 37℃、5% CO₂条件下,传代周期约 18-24 小时,增殖速度快于普通 BHK-21 细胞,可适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,兼容贴壁与悬浮培养,高密度培养(细胞密度达 2×10⁶个 /mL)时仍能维持活性,适合大规模功能实验。
表达特征:CIAPIN1 主要定位于细胞质,表达量是亲本细胞的 5-8 倍(通过 Western blot 定量),长期传代(>30 代)后表达量波动<12%。蛋白分子量约 34kDa,与天然 CIAPIN1 的分子量一致,且能与特异性抗体结合,功能上保留其抗凋亡活性 —— 经凋亡诱导剂处理后,细胞存活率比亲本 BHK-21 高 40%-50%。
CIAPIN1 功能机制研究
肿瘤耐药机制与药物筛选
病毒复制与宿主相互作用研究
优势:CIAPIN1 表达稳定,避免瞬时转染的表达波动;功能特异性高,仅强化 CIAPIN1 相关通路,减少其他基因干扰;增殖速度快,实验周期短,适合大规模筛选;保留 BHK-21 细胞的病毒敏感性,可同时研究基因功能与病毒相互作用,应用场景多元。
局限性:长期培养需维持嘌呤霉素筛选压力(2μg/mL),否则易丢失表达载体;CIAPIN1 过表达可能轻微改变细胞代谢(如葡萄糖摄取增加),实验设计中需设置亲本细胞对照;作为仓鼠细胞系,其信号通路与人类细胞存在差异,结果外推至人体时需结合人源细胞验证。
培养条件:基础培养基为含 10% 胎牛血清、2μg/mL 嘌呤霉素的 MEM,添加抗菌剂防污染。传代时采用细胞刮分离,贴壁培养融合度控制在 70%-80%,避免过度密集导致接触抑制。进行凋亡实验时,建议使用无血清培养基同步化细胞 24 小时,以减少血清成分对结果的干扰。
功能检测方法:验证 CIAPIN1 活性可采用流式细胞术检测凋亡率(Annexin V/PI 双染),或 Western blot 检测下游抗凋亡蛋白(如 Bcl-2)的表达变化;研究通路激活时,推荐检测磷酸化 Akt(p-Akt)的水平,以量化 CIAPIN1 的功能活性。
冻存与复苏:冻存液含 10% DMSO、2μg/mL 嘌呤霉素的wan全培养基,液氮保存可维持活性 3 年以上;复苏时 37℃快速解冻,离心去除 DMSO 后用含筛选压力的培养基重悬,传代 1 次后即可用于实验,确保细胞状态稳定。
该细胞系的建立为 CIAPIN1 功能研究提供了标准化工具,推动了对细胞存活调控机制的理解。在基础研究领域,其助力阐明了 CIAPIN1 在凋亡抑制、应激响应中的作用,为解析肿瘤细胞的存活优势提供了分子依据;在应用领域,其为筛选 CIAPIN1 抑制剂与逆转耐药药物提供了可靠模型,加速了抗肿瘤药物的研发进程。随着基因编辑技术的融合(如构建 CIAPIN1 敲除对照株),该细胞系的研究价值将进一步提升,为肿瘤精准治疗靶点的验证提供更全面的实验支持。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
产品咨询
相关产品
型号:BY-1324
型号:BY-1324
型号:BY-1324
型号:BY-1324
Copyright©2025 上海乾思生物科技有限公司 版权所有 备案号:沪ICP备2023041625号-7 sitemap.xml 技术支持:化工仪器网 管理登陆