CTLL-2 [CTLL2]小鼠T淋巴细胞系
CTLL-2 [CTLL2]小鼠T淋巴细胞系源自 C57BL/6 小鼠的细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL），是保留 T 细胞免疫特性和 IL-2 依赖性增殖特征的经典免疫细胞模型，在 T 细胞活化机制、细胞因子信号传导及免疫调节剂筛选研究中具有重要价值，为解析 T 细胞的增殖调控和细胞毒性功能提供了理想工具。
该细胞系呈现典型的 T 淋巴细胞形态与表型特征。显微镜下，细胞呈圆形或椭圆形，以悬浮生长为主，偶见少量细胞聚集，单个细胞直径约 10-12μm，核质比高，细胞核呈圆形，染色质呈粗网状，可见 1-2 个清晰核仁，核分裂象每 10 个高倍视野 4-6 个，胞质少而嗜碱性，可见少量嗜天青颗粒（类似细胞毒性颗粒）。电镜下可见胞质内有较多游离核糖体和少量线粒体，部分细胞胞质内存在电子致密颗粒（含穿孔素和颗粒酶），符合细胞毒性 T 细胞的超微结构特点。免疫表型分析显示，细胞高表达 T 细胞特异性标志物 CD3（阳性率 95%）、CD8（阳性率 90%），流式细胞术检测显示 CD3⁺CD8⁺双阳性细胞比例显著高于其他 T 细胞系，而 CD4 表达阴性，证实其细胞毒性 T 细胞（CD8⁺）的表型特征，同时表达 IL-2 受体 α 链（CD25，阳性率 85%），为其 IL-2 依赖性增殖提供分子基础。
体外培养体系中，CTLL-2 细胞展现出严格的 IL-2 依赖性增殖特性与稳定的功能活性。最适培养条件为含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基，添加 20U/mL 重组 IL-2，在 37℃、5% CO₂环境下，传代周期约 48 小时，倍增时间约 30 小时，显著快于原代 T 细胞。其显著特点是脱离 IL-2 后 24 小时即停止增殖，48 小时开始凋亡（凋亡率达 60%），这种严格的细胞因子依赖性使其成为检测 IL-2 活性的金标准。增殖动力学研究显示，IL-2 浓度在 1-100U/mL 范围内时，细胞增殖率与 IL-2 浓度呈正相关（相关系数 r=0.92），100U/mL 时达到增殖平台期，这种剂量依赖性为细胞因子活性测定提供了量化依据。软琼脂克隆形成实验显示，仅在含 IL-2 的培养基中可形成克隆（形成率 25%），无 IL-2 时克隆形成率为 0，连续传代 50 次后，CD3⁺CD8⁺表型及 IL-2 依赖性无明显改变，冻存复苏存活率超 90%。
功能研究证实其保留细胞毒性 T 细胞的核心活性。靶细胞杀伤实验显示，经抗原肽刺激后，CTLL-2 细胞可特异性识别并杀伤表达同源 MHC-Ⅰ 类分子的靶细胞（如 EL-4 细胞），杀伤率随效靶比升高而增加，效靶比为 50:1 时杀伤率达 75%，这种细胞毒性依赖于穿孔素和颗粒酶 B 的释放（刺激后分泌量分别增加 4 倍和 5 倍）。脱颗粒实验显示，CD107a（溶酶体相关膜蛋白 1）在刺激后表达上调 3 倍，证实其颗粒释放功能正常。与原代 CTL 相比，其细胞毒性更稳定，批次间差异小于 10%，适合标准化的免疫功能实验。
信号传导机制研究揭示其 IL-2 受体通路的核心作用。Western blot 分析显示，IL-2 刺激后 15 分钟，细胞内 STAT5 磷酸化水平升高 8 倍，PI3K/Akt 通路激活（p-Akt 增加 6 倍），MAPK/ERK 通路亦被激活（p-ERK 增加 4 倍），这三条通路共同调控细胞增殖与存活，STAT5 抑制剂处理可使 IL-2 诱导的增殖率下降 70%，显著高于其他通路抑制剂，证实 STAT5 是核心调控分子。与其他 T 细胞系相比，其 IL-2 受体 β 链（CD122）表达量更高（是 Jurkat 细胞的 3 倍），这一特性使其对 IL-2 的敏感性显著增强（半数有效浓度仅为 Jurkat 细胞的 1/5）。
在免疫研究应用中，CTLL-2 细胞是多领域研究的关键工具。在细胞因子检测方面，其 IL-2 依赖性增殖特性被用于生物活性测定，可量化检测血清、细胞培养上清中的 IL-2 浓度，灵敏度达 1U/mL，较 ELISA 法更能反映生物活性。在免疫调节剂筛选中，该细胞系可评估药物对 T 细胞增殖的影响，某新型免疫增强剂可使 IL-2 诱导的增殖率提升 40%，而免疫抑制剂环bao素 A 在 100ng/mL 浓度时可wan全阻断其增殖。在肿瘤免疫研究中，经基因修饰表达嵌合抗原受体（CAR）的 CTLL-2 细胞，可特异性识别肿瘤抗原并增强杀伤活性（杀伤率提升至 90%），为 CAR-T 细胞疗法研究提供简化模型。
动物模型研究中，该细胞系可用于评估体内 T 细胞功能。将 1×10⁶个 CFSE 标记的 CTLL-2 细胞静脉注射免疫缺陷小鼠，在 IL-2 腹腔注射组中，细胞可在脾脏和淋巴结存活并增殖（7 天细胞数量增加 10 倍），而无 IL-2 组细胞在 3 天内几乎wan全清除，这种体内增殖特性与体外结果一致。联合肿瘤模型实验显示，CTLL-2 细胞可抑制同源肿瘤细胞（如 B16 黑色素瘤）的生长，使肿瘤体积缩小 50%，生存期延长 30%，证实其体内抗肿瘤活性。
在自身免疫病研究中，CTLL-2 细胞被用于模拟异常活化的 T 细胞。实验显示，在高浓度 IL-2 环境下，细胞可突破免疫耐受，对自身组织来源的靶细胞产生杀伤活性（杀伤率 35%），这种异常活性可被糖皮质激素抑制（1μM 地塞mi松使杀伤率下降 60%），为自身免疫病的药物筛选提供模型。与其他 T 细胞系相比，其对免疫抑制药物的反应更接近原代 T 细胞，半数抑制浓度差异小于 2 倍。
代谢特征研究揭示其活化 T 细胞的代谢表型。 Seahorse 能量代谢分析显示，IL-2 刺激后，细胞的糖酵解速率增加 3 倍，氧化磷酸化水平提升 2 倍，呈现 “混合代谢" 特征，这种代谢重编程与其高表达葡萄糖转运蛋白 GLUT1（IL-2 刺激后上调 3 倍）相关。谷an酰胺消耗速率亦增加 2 倍，谷an酰胺酶抑制剂处理可使 IL-2 诱导的增殖率下降 45%，证实谷an酰胺代谢在其增殖中的重要作用，为靶向 T 细胞代谢的免疫调节研究提供线索。
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