HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮细胞系
HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮细胞系细胞系是研究乳腺上皮细胞转化及病毒致癌机制的du特模型，以稳定整合 SV40 大 T 抗原基因、保留部分正常乳腺上皮表型及潜在转化能力为核心特征，在乳腺上皮细胞永生化机制、病毒 oncogene 作用及乳腺癌早期发生研究中应用广泛，为解析乳腺上皮细胞从正常到恶性转化的早期事件提供了可靠实验工具。
来源与背景：该细胞系于 1974 年从健康女性的乳腺组织中分离，通过整合猿猴病毒 40（SV40）的大 T 抗原基因实现永生化，是首ge被证实稳定表达 SV40 大 T 抗原的人乳腺上皮细胞系。与原发性乳腺癌细胞系（如 MCF-7）相比，其源自正常乳腺组织，经病毒基因修饰后既保留部分正常乳腺上皮特性，又具备永生化特征，尤其适合研究乳腺上皮细胞的永生化机制及病毒致癌基因的作用。作为连接正常乳腺上皮与恶性转化的过渡模型，HBL-100 的建立填bu了乳腺上皮细胞永生化研究的空白，至今仍是探讨病毒与乳腺癌关联及上皮细胞转化早期事件的重要参照。
细胞特性：形态上呈现典型的上皮样特征，贴壁生长且排列紧密呈铺路石样，细胞呈多边形，细胞质丰富，细胞核相对规则，核仁不明显，核质比约 1:1.5，形态接近正常乳腺上皮细胞，但核分裂象略多于正常细胞。核心特性体现为SV40 大 T 抗原稳定表达，免疫印迹检测显示大 T 抗原持续高表达，该蛋白可与 p53、Rb 等抑癌蛋白结合并使其失活，这一特征是细胞永生化的关键；部分正常表型保留，表达乳腺上皮标志物 CK18、CK19，阳性率分别为 90%、85%，同时表达上皮细胞黏附分子 E - 钙粘蛋白，维持一定的细胞间连接，与正常乳腺上皮细胞的表型差异较小；有限恶性潜能，体外培养倍增时间约 72-96 小时，克隆形成率约 25%，裸鼠皮下接种成瘤率仅 10%，且成瘤速度极慢，6 周肿瘤体积约 0.2±0.1 cm³，远低于恶性乳腺癌细胞系，表明其恶性程度低，处于转化早期阶段。传代时采用常规消化液处理，因贴壁牢固，需消化 5-6 分钟，传代比例 1:2-1:3，连续传代 100 次后仍保持 SV40 大 T 抗原表达及上皮形态，未出现明显恶性进展。
培养条件：适宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基，添加 1% 抗菌剂及 5μg/ml 胰岛素，培养环境需控制在 37℃、5% CO₂饱和湿度。细胞对胰岛素依赖明显，去除胰岛素后增殖速率下降 40%，细胞形态变得扁平。细胞密度维持在 30%-70%，过度汇合会导致细胞接触抑制明显，增殖停滞。对血清质量敏感，低质量血清可使细胞凋亡率从 5% 升至 20%，传代时用含血清培养基终止消化，冻存液推荐含 10% DMSO 的胎牛血清，复苏后存活率可达 80% 以上，24 小时贴壁率超过 90%，细胞功能恢复正常。
检测鉴定：经微生物筛查，无支原体、细菌、真菌及常见病毒污染，符合实验细胞质量标准。免疫细胞化学检测显示 CK18、CK19 阳性，ER、PR 阴性，与正常乳腺上皮细胞的激素受体表型一致。PCR 及测序证实 SV40 大 T 抗原基因稳定整合于细胞基因组，且无其他致癌基因的异常激活。染色体核型分析呈现近二倍体核型，存在少数染色体数目异常，但结构畸变较少，与正常乳腺上皮细胞的核型差异较小。功能验证中，p53 蛋白检测显示其与大 T 抗原形成复合物，失去正常转录活性，证实大 T 抗原的功能活性。
应用领域：在永生化机制研究中，揭示 SV40 大 T 抗原通过灭活 p53 和 Rb 通路使乳腺上皮细胞突破增殖极限，为 “病毒蛋白 - 抑癌蛋白失活 - 永生化" 机制提供直接证据。在病毒致癌研究中，用于探索 SV40 大 T 抗原与乳腺上皮细胞恶性转化的关联，发现长期培养中该细胞系可自发出现染色体不稳定性，为病毒基因启动转化提供线索。在药物筛选方面，作为评估化学致癌物诱导转化的模型，研究显示苯并芘处理可使细胞克隆形成率提升至 45%，部分细胞获得更强的侵袭能力。此外，该细胞系可用于乳腺上皮细胞功能研究，如乳腺球蛋白的合成与分泌调控，为理解正常乳腺生理功能提供实验基础。
与其他乳腺细胞系相比，HBL-100 的优势在于其du特的 “正常 - 永生化" 过渡特征及 SV40 大 T 抗原的稳定表达，能更真实地模拟乳腺上皮细胞转化的早期阶段。通过该细胞系的研究，已阐明多个调控乳腺上皮永生化的关键基因，为解析乳腺癌发生的早期机制及病毒致癌作用提供了扎实的实验依据，持续推动乳腺肿瘤发生机制研究的发展。
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