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GL-37非洲绿猴肾细胞系
产品型号:BY-1378
简要描述:

GL-37非洲绿猴肾细胞系,上皮样,贴壁生长,对肠道病毒等敏感性高,支持病毒高效复制,适用于病毒分离、疫苗研发及抗病du药物筛选。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

GL-37非洲绿猴肾细胞系
GL-37非洲绿猴肾细胞系,GL-37 细胞系是非洲绿猴肾上皮细胞的克隆衍生株,因对脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒等肠道病毒具有高度敏感性,且能支持病毒高效复制,成为肠道病毒分离鉴定、疫苗研发及抗病du药物筛选的特色模型。其保留肾上皮细胞的生物学特征与培养稳定性,同时因肠道病毒受体的高表达,为肠道病毒学研究提供了专属实验平台。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与克隆背景:该细胞系源自 20 世纪 70 年代分离的非洲绿猴肾原代细胞,通过极限稀释法筛选获得单克隆株(“GL" 代表shen源组织特性)。筛选过程以肠道病毒敏感性为核心指标,未引入外源基因,全基因组测序显示其染色体数目为 60(近二倍体),与非洲绿猴肾原代细胞遗传相似度>97%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<2%,群体均一性优于早期混合株(流式检测 G1 期细胞比例偏差<5%)。

  • 形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈短梭形或多边形,胞质透亮,细胞排列较 VERO-76 疏松;悬浮培养易聚集成小团(直径 30-50μm),以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期约 28-32 小时,适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<10%,冻存复苏后存活率超 87%,无血清驯化后细胞密度可达 3.5×10⁵个 /cm²。

  • 功能特征:核心优势在于肠道病毒受体高表达与复制支持能力:脊髓灰质炎病毒受体(PVR)表达量较普通猴肾细胞高 3 倍(免疫印迹检测),柯萨奇病毒 - 腺病毒受体(CAR)阳性率>90%(流式检测)。感染脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型后 72 小时,病毒滴度可达 10⁷-10⁸ PFU/mL,较 VERO-76 细胞高 1-2 个数量级;感染柯萨奇 B 组病毒后 48 小时,细胞病变(CPE)率达 95%,表现为细胞圆缩、脱落,显著快于其他猴肾细胞系。

二、核心应用领域
  1. 肠道病毒分离与鉴定

该细胞系是肠道病毒分离的 “金标准" 工具,尤其适用于临床样本中脊髓灰质炎病毒的检测。粪便样本接种后,脊髓灰质炎病毒分离效率达 96%,较 RD 细胞缩短 12-24 小时,且能区分疫苗株与野毒株(通过 CPE 形态差异:野毒株病变更迅猛)。在柯萨奇病毒分离中,其对 B 组病毒的检出率较 HEp-2 细胞高 30%,可检测出低至 10 PFU 的病毒载量,为手足口病等肠道病毒感染的病原学诊断提供关键依据。
  1. 肠道病毒疫苗研发与生产

因符合 WHO 生物制品生产标准,GL-37 广泛用于脊髓灰质炎减毒活疫苗的研发与生产。在微载体悬浮培养体系中,脊髓灰质炎病毒滴度可达 8×10⁷ PFU/mL,单批次 500L 反应器可生产 300 万剂疫苗,抗原活性单位(CCID₅₀)较传统 Vero 细胞工艺提升 40%。其无血清驯化株可降低血清源性污染风险,疫苗中宿主细胞蛋白残留量<50ng / 剂,符合国际疫苗标准。在工艺优化中,通过调控培养基中钙离子浓度(1.2-1.5mM),可使病毒收获时间提前 6 小时,显著提升生产效率。
  1. 抗病du药物筛选与评价

该细胞系为肠道病du药物研发提供可靠模型。在抗脊髓灰质炎病du药物筛选中,通过空斑减数实验可精准测定药物 EC₅₀(如普来可那立 EC₅₀为 0.8μM),结果与动物实验相关性达 0.88。在柯萨奇病du药物测试中,其可区分进入抑制剂与复制抑制剂的作用差异,空斑抑制率检测误差<4%。基于其建立的 384 孔板高通量筛选体系,日均可检测 500 种化合物,为肠道病毒应急药物研发提供快速评估工具。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作

  1. 复苏:冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(MEM+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 瓶,37℃、5% CO₂培养,24 小时贴壁率超 90%。

  1. 换液:接种 48 小时后首ci换液,去除代谢废物,此后每 2-3 天换液一次,维持细胞密度在 1×10⁴-6×10⁴个 /cm²(密度过高会降低肠道病毒敏感性)。

  1. 传代:融合度达 75% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 细胞解离液,37℃孵育 2 分钟,镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止,按 1:5 比例传代,避免过度融合导致受体表达下调。

  • 病毒培养流程

  1. 接种准备:将细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%,接种前用无血清培养基洗涤 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀释的肠道病毒液(如脊髓灰质炎病毒悬液),37℃吸附 1 小时,期间每 15 分钟轻摇一次,吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。

  1. 观察与收获:脊髓灰质炎病毒感染后 48-72 小时观察 CPE,待 80% 细胞病变时收获上清,-80℃冻存,通过空斑法或 RT-PCR 测定病毒滴度。

  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,冻存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 5×10⁶个 /mL,分装冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮,保存期超 5 年,复苏后传代 2 次再用于病毒实验(确保受体表达稳定)。

四、优势与局限性
  • 优势:对肠道病毒(尤其脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒)敏感性ji高(滴度较普通猴肾细胞高 1-2 个数量级);遗传背景稳定,实验重复性好(CV<6%);符合 GMP 标准,无内源性病毒污染;可适应无血清培养,便于工业化生产;病毒复制周期短,病变特征典型,易于观察。

  • 局限性:对包膜病毒(如狂犬病毒)敏感性较低;贴壁依赖性强,悬浮培养难度高于 CHO 细胞;长期传代(>100 次)可能出现 PVR 受体表达下调(约 12%);缺乏干扰素合成能力,可能高估药物体内抗病毒效果。

五、研究意义
GL-37 细胞系的应用为全球消灭脊髓灰质炎行动提供了关键技术支撑,其高效分离与培养能力使脊髓灰质炎病毒检测灵敏度提升 40%,直接助力野毒株的快速追踪。在基础研究中,其揭示了肠道病毒受体(如 PVR)与病毒入侵的构象依赖关系;在公共卫生领域,其支撑了数十亿剂脊髓灰质炎疫苗的生产,是 WHO 推荐的肠道病毒疫苗生产核心细胞模型,为肠道病毒相关传染病的防控搭建了基础研究与产业转化的关键桥梁。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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