技术文章
TECHNICAL ARTICLES详细介绍
来源与转化机制
形态与生长特征
遗传与功能特性
染色体核型:保留绒猴二倍体核型特征(2n=46),长期传代后异倍体比例<15%,核型稳定性优于人类 EBV 转化的 B 细胞系。
EBV 相关标志物:持续表达 EBV 潜伏抗原(EBNA1、LMP1)与早期抗原(EA),晚期抗原(VCA)表达率约 30%-40%(免疫荧光检测),可自发释放传染性 EBV 颗粒(滴度 10⁴-10⁵ PFU/mL)。
受体表达:高表达 EBV 主要受体 CD21(阳性率>90%)及 B 细胞表面标志物 CD19、CD20,支持 EBV 再次感染与复制。
EBV 生物学研究
病毒复制周期解析:B95-8 可通过丁酸钠或巴佛洛霉素 A1 诱导,使 EBV 从潜伏状态进入裂解期,实现病毒全生命周期的体外模拟。例如,通过诱导后不同时间点的转录组分析,已鉴定出 30 余个新的 EBV 裂解期调控基因,为理解病毒潜伏 - 裂解转换机制提供关键数据。
病毒颗粒制备:作为实验室 EBV 标准来源,其分泌的病毒颗粒可用于感染人 B 淋巴细胞,建立 EBV 转化的永生化细胞模型(转化效率约 10⁻⁴-10⁻³),用于研究 EBV 与淋巴瘤、鼻咽癌发生的关联。
干扰素生产与抗病毒研究
天然干扰素制备:B95-8 在 EBV 刺激下可高表达 Ⅰ 型干扰素(IFN-α/β),经诱导后干扰素活性单位可达 10⁴ IU/mL,是早期人用干扰素制剂的重要生产来源。其分泌的干扰素对 EBV、疱疹病毒等具有广谱抑制作用,为天然抗病du药物研发提供参考。
抗病du药物筛选:基于其 EBV 复制特性,可构建药物筛选模型。例如,通过检测抗病du药物对 EBV DNA 聚合酶的抑制效果,测定药物 EC₅₀,与临床疗效相关性达 0.86,为抗 EBV 药物评估提供可靠平台。
疫苗研发与诊断试剂生产
EBV 疫苗候选抗原制备:B95-8 可高效表达 EBV 糖蛋白 gp350(病毒主要包膜蛋白),重组 gp350 纯度可达 95% 以上,已用于 EBV 疫苗的临床前研究,动物实验显示其可诱导中和抗体效价达 1:10000 以上。
诊断抗原制备:其表达的 EBV VCA、EA 可作为诊断抗原,用于传染性单核细胞增多症及 EBV 相关肿瘤的血清学检测(如 ELISA 试剂盒),敏感性达 90%,特异性>95%。
基础培养方案
培养基:RPMI 1640 培养基添加 10% 胎牛血清,pH 维持在 7.2-7.4,可加入营养补充剂增强细胞活力。
传代流程:取对数生长期细胞悬液,1000rpm 离心 5 分钟,弃上清后用新鲜培养基重悬,按 1:3 比例接种至新培养瓶,避免细胞密度过高导致凋亡(存活率<70%)。
冻存保护:取密度 1×10⁷ cells/mL 的细胞悬液,加入等量含 20% DMSO 的培养基(终浓度 10% DMSO),分装后经程序降温盒 - 80℃过夜,转移至液氮长期保存。
EBV 诱导与收集
裂解期诱导:向对数期细胞中加入 3mM 丁酸钠,37℃培养 48 小时后更换含 0.1μg/mL 巴佛洛霉素 A1 的培养基,继续培养 24 小时,EBV 分泌量可提升 5-10 倍。
病毒收集:收集诱导后 72 小时的细胞上清,3000rpm 离心 30 分钟去除细胞碎片,0.45μm 滤膜过滤后,-80℃分装保存,使用前需通过噬斑实验测定滴度。
优势:
EBV 分泌稳定:是能持续释放高滴度传染性 EBV 的细胞系之一,为 EBV 研究提供标准化病毒来源。
功能多样性:既可用于病毒学基础研究,又能生产干扰素与诊断抗原,应用场景广泛。
培养简便:悬浮生长无需贴壁支持,适合大规模悬浮培养,便于工业化生产。
局限性:
物种差异:作为绒猴细胞,其 EBV 复制调控机制与人类细胞存在差异,部分研究结果需在人源细胞中验证。
病毒安全性:分泌的 EBV 具有传染性,操作需在生物安全二级实验室进行,避免实验室感染风险。
诱导效率波动:EBV 裂解期诱导效率受细胞代次影响(传代>50 次时下降约 40%),需定期筛选高分泌亚克隆。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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