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CD14/CHO-K1中国仓鼠卵巢癌细胞系
产品型号:BY-1336
简要描述:

CD14/CHO-K1中国仓鼠卵巢癌细胞系,上皮样,贴壁生长,稳定表达 CD14 分子,可介导炎症信号,适用于 CD14 功能研究、炎症通路分析及相关疾病药物筛选。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

CD14/CHO-K1中国仓鼠卵巢癌细胞系
CD14/CHO-K1中国仓鼠卵巢癌细胞系是经基因工程改造的 CHO-K1 衍生株,通过稳定表达人源 CD14 分子获得特异性功能,因 CD14 表达量高、信号传导活性稳定,成为研究 CD14 介导的炎症反应、病原体识别及相关疾病机制的重要模型。其保留 CHO-K1 细胞遗传稳定、易培养的优势,同时赋予了 CD14 相关通路研究的专属功能,为解析该分子的生物学作用提供了标准化细胞工具。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与构建:该细胞系以 CHO-K1 细胞为亲本,通过脂质体转染将含人 CD14 基因的表达载体(含 CMV 启动子与新mei素抗性基因)导入细胞,经 G418 筛选及单克隆纯化获得稳定株。“CD14" 明确标识其表达的功能分子,与普通 CHO-K1 细胞形成显著区分。其保留卵巢上皮样细胞的基本形态,同时因 CD14 表达呈现特异性功能特征:可通过 CD14 识别脂多糖(LPS)等配体,激活下游 TLR4/NF-κB 信号通路,模拟天然免疫细胞的模式识别功能。

  • 形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长,细胞呈多边形,排列规则,边界清晰,核质比正常。在 37℃、5% CO₂条件下,增殖稳定,传代周期约 24-30 小时,可适应含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基,无需特殊生长因子,传代 60 次以上仍能维持 CD14 高表达(表达量为亲本细胞的 20-30 倍),功能活性无明显衰减,显著优于瞬时转染系统。

  • 表达特征:CD14 分子主要定位于细胞膜(通过免疫荧光验证),少量存在于胞质中,表达量达(1.2-1.8)×10⁵分子 / 细胞(流式细胞术检测)。该分子保留天然构象,能特异性结合 LPS(解离常数 Kd≈5×10⁻⁹ M),并介导 LPS 诱导的 NF-κB 核转位及 IL-6、TNF-α 等炎症因子分泌(ELISA 检测显示分泌量随 LPS 浓度升高而增加),功能活性接近人单核细胞来源的 CD14。

二、核心应用领域
  1. CD14 介导的信号通路研究

该细胞系是解析 CD14 在天然免疫中的作用机制的理想模型。通过 LPS 刺激实验,可观察 CD14 与 TLR4、MD-2 的共定位及下游信号分子(如 IRAK1、TRAF6)的磷酸化动态,明确其在病原体识别中的信号传导级联;或通过 RNA 干扰下调 CD14 表达,对比分析炎症因子分泌量的变化(如 IL-6 分泌减少 70%-80%),验证其在通路中的必要性。例如,在研究 LPS 耐受机制时,其能稳定呈现反复刺激后 CD14 表达下调及 NF-κB 活性降低的特征,为免疫调节研究提供量化数据。
  1. 感染与炎症疾病模型构建

该细胞系可用于模拟 CD14 参与的感染性疾病病理过程。通过与革兰氏阴性菌共培养,可观察 CD14 介导的细菌黏附与吞噬增强效应(黏附率是亲本细胞的 4-6 倍),解析其在细菌清除中的作用;或在炎症性疾病研究中,模拟内毒素血症状态下 CD14 过度激活导致的细胞因子风暴,评估抗炎药物对 CD14-LPS 结合的阻断效果。因 CD14 表达稳定,模型重复性高(实验变异系数<6%),为感染性疾病药物筛选提供可靠平台。
  1. CD14 靶向药物筛选与评估

在药物研发中,该细胞系可用于筛选阻断 CD14 功能的候选化合物。通过检测药物对 CD14-LPS 结合的抑制率(如荧光偏振法)及下游细胞因子(IL-6、TNF-α)的分泌量变化,评估药物活性;或通过流式细胞术分析药物对 CD14 膜定位的影响,筛选具有特异性结合能力的分子。其优势在于可排除内源性 CD14 的干扰,直接反映药物与外源 CD14 的相互作用,为靶向药物开发提供精准数据。
三、优势与局限性
  • 优势:CD14 表达量高且稳定,长期传代后功能活性波动<10%,实验重复性优于原代细胞;遗传背景清晰,与 CHO-K1 细胞同源性高,便于通过亲本对照排除非特异性效应;可同时表达 CD14 及共受体(如 TLR4),完整模拟天然信号传导环境,功能更接近体内状态;培养条件简单,兼容贴壁与悬浮培养,适合大规模药物筛选。

  • 局限性:作为仓鼠细胞,CD14 下游信号分子的物种差异可能导致部分通路激活效率与人类细胞不同;缺乏天然免疫细胞的其他模式识别受体,无法wan全模拟复杂的免疫微环境;高表达 CD14 可能导致细胞对 LPS 过度敏感,实验需严格控制配体浓度。

四、培养与实验注意事项
  • 培养条件:常规使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基,添加 G418(400μg/mL)维持抗性筛选,37℃、5% CO₂培养箱中生长良好。传代时控制融合度在 70%-80%,采用温和消化方法分离细胞,避免机械损伤影响 CD14 表达。进行功能实验时,建议使用无血清培养基饥饿处理 12-24 小时,减少血清成分对信号通路的干扰。

  • 质控与安全:定期通过流式细胞术检测 CD14 膜表达量,Western blot 验证蛋白完整性;STR 鉴定确保细胞纯度,避免交叉污染。因涉及 LPS 等生物试剂,操作需符合生物安全二级标准,冻存使用含 10% DMSO 的wan全培养基,液氮保存可维持活性 5 年以上。

五、研究意义
CD14/CHO-K1 细胞系的建立为 CD14 相关研究提供了标准化工具,推动了对天然免疫识别机制的深入理解。在基础研究中,其助力阐明 CD14 在感染与炎症中的作用,为发现新的免疫调节靶点提供线索;在应用领域,其加速了 CD14 靶向药物的研发进程,尤其对脓毒症、炎症性肠病等疾病的治疗具有重要意义。随着基因编辑技术的应用(如敲除仓鼠内源抑制因子),该细胞系的功能将进一步优化,在精准免疫研究中发挥更大价值。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

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