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来源与构建:该细胞系以 CHO-K1 细胞为亲本,通过脂质体转染将含人 CD14 基因的表达载体(含 CMV 启动子与新mei素抗性基因)导入细胞,经 G418 筛选及单克隆纯化获得稳定株。“CD14" 明确标识其表达的功能分子,与普通 CHO-K1 细胞形成显著区分。其保留卵巢上皮样细胞的基本形态,同时因 CD14 表达呈现特异性功能特征:可通过 CD14 识别脂多糖(LPS)等配体,激活下游 TLR4/NF-κB 信号通路,模拟天然免疫细胞的模式识别功能。
形态与增殖:体外培养呈典型上皮样形态,贴壁生长,细胞呈多边形,排列规则,边界清晰,核质比正常。在 37℃、5% CO₂条件下,增殖稳定,传代周期约 24-30 小时,可适应含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基,无需特殊生长因子,传代 60 次以上仍能维持 CD14 高表达(表达量为亲本细胞的 20-30 倍),功能活性无明显衰减,显著优于瞬时转染系统。
表达特征:CD14 分子主要定位于细胞膜(通过免疫荧光验证),少量存在于胞质中,表达量达(1.2-1.8)×10⁵分子 / 细胞(流式细胞术检测)。该分子保留天然构象,能特异性结合 LPS(解离常数 Kd≈5×10⁻⁹ M),并介导 LPS 诱导的 NF-κB 核转位及 IL-6、TNF-α 等炎症因子分泌(ELISA 检测显示分泌量随 LPS 浓度升高而增加),功能活性接近人单核细胞来源的 CD14。
CD14 介导的信号通路研究
感染与炎症疾病模型构建
CD14 靶向药物筛选与评估
优势:CD14 表达量高且稳定,长期传代后功能活性波动<10%,实验重复性优于原代细胞;遗传背景清晰,与 CHO-K1 细胞同源性高,便于通过亲本对照排除非特异性效应;可同时表达 CD14 及共受体(如 TLR4),完整模拟天然信号传导环境,功能更接近体内状态;培养条件简单,兼容贴壁与悬浮培养,适合大规模药物筛选。
局限性:作为仓鼠细胞,CD14 下游信号分子的物种差异可能导致部分通路激活效率与人类细胞不同;缺乏天然免疫细胞的其他模式识别受体,无法wan全模拟复杂的免疫微环境;高表达 CD14 可能导致细胞对 LPS 过度敏感,实验需严格控制配体浓度。
培养条件:常规使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基,添加 G418(400μg/mL)维持抗性筛选,37℃、5% CO₂培养箱中生长良好。传代时控制融合度在 70%-80%,采用温和消化方法分离细胞,避免机械损伤影响 CD14 表达。进行功能实验时,建议使用无血清培养基饥饿处理 12-24 小时,减少血清成分对信号通路的干扰。
质控与安全:定期通过流式细胞术检测 CD14 膜表达量,Western blot 验证蛋白完整性;STR 鉴定确保细胞纯度,避免交叉污染。因涉及 LPS 等生物试剂,操作需符合生物安全二级标准,冻存使用含 10% DMSO 的wan全培养基,液氮保存可维持活性 5 年以上。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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