VERO-E6-ACE2+非洲绿猴肾细胞系，VERO-E6-ACE2 + 为高表达 ACE2 的非洲绿猴肾细胞系，上皮样，贴壁生长，对冠状病毒敏感性强，支持高效复制，适用于病毒研究及疫苗药物研发。

ACE2 表达与定位：ACE2 主要定位于细胞膜表面，表达量达 1.5×10⁵分子 / 细胞（流式细胞术定量），较亲本细胞高 20 倍以上，且呈均一性表达（变异系数＜6%），为病毒感染提供均一的受体环境。

病毒敏感性：对 SARS-CoV-2 的感染效率达 98%（免疫荧光检测核蛋白 N），感染后 48 小时病毒滴度达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL，较 VERO-E6 细胞高 2-3 个数量级；对 SARS-CoV、HCoV-229E 等其他冠状病毒也具有广谱敏感性，滴度提升 1-2 个数量级。

生物安全性：无致瘤性（裸鼠接种实验阴性），外源病毒与支原体检测均为阴性，符合人用疫苗生产的细胞基质要求。

病毒受体结合研究：利用 VERO-E6-ACE2 + 的高表达特性，可精准解析冠状病毒 S 蛋白与 ACE2 的相互作用。例如，通过表面等离子体共振技术，测定 SARS-CoV-2 S 蛋白受体结合域（RBD）与 ACE2 的结合亲和力（KD=15nM），较亲本细胞测定结果更稳定（变异系数＜3%），为突变株的亲和力变化研究提供基准数据。

入侵途径解析：该细胞系可用于验证病毒入侵的辅助因子，如 TMPRSS2 的作用。通过共表达 ACE2 与 TMPRSS2，发现病毒感染效率进一步提升 50%，证实 TMPRSS2 介导的 S 蛋白切割是病毒入侵的关键步骤，为靶向入侵过程的药物设计提供分子靶点。

疫苗株筛选：因病毒产量高，可快速评估疫苗株的复制能力与免疫原性。例如，在该细胞系中筛选的 SARS-CoV-2 减毒株，病毒滴度达 10⁷.⁵ TCID₅₀/mL，且在动物实验中显示出良好的免疫原性（中和抗体效价达 1:1024），为减毒活疫苗开发提供候选株。

灭活疫苗生产：已用于 SARS-CoV-2 灭活疫苗的工业化生产研究。在微载体培养系统中，病毒滴度达 5×10⁷ TCID₅₀/mL，单批次 500L 反应器可生产 500 万剂疫苗，批间差异＜5%，疫苗中残留宿主细胞 DNA＜10pg / 剂，符合 WHO 规定的生物制品标准。

受体阻断剂筛选：基于其高 ACE2 表达，可构建受体阻断剂的高通量筛选模型。例如，通过检测化合物对 S 蛋白与 ACE2 结合的阻断效果，发现某天然产物衍生物的 IC₅₀=0.5μM，且对细胞毒性低（CC₅₀＞50μM），后续实验证实其可在动物模型中降低病毒载量 100 倍以上，为抗冠状病du药物研发提供先导化合物。

药物作用机制验证：可区分药物的作用靶点（病毒或宿主）。例如，某化合物在 VERO-E6-ACE2 + 细胞中对 SARS-CoV-2 的抑制率达 90%，而在 ACE2 低表达细胞中抑制率仅 30%，证实其作用机制为阻断 ACE2 与 S 蛋白结合，而非直接抑制病毒复制。

培养基：DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清、非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4，可加入抗生素混合液预防污染。

传代流程：当细胞融合度达 80%-90% 时，弃旧培养基，PBS 洗涤 2 次，加入细胞解离液，37℃孵育 3-5 分钟至细胞脱落，加入含血清的培养基终止消化，按 1:4 比例接种至新培养瓶，避免过度融合导致 ACE2 表达下调。

冻存保护：取对数生长期细胞，用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 1×10⁶个 /mL，程序降温后液氮保存，复苏后传代 2 次再用于病毒实验（确保受体表达稳定）。

冠状病毒接种：细胞以 2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时至融合度 70%，用无血清培养基稀释病毒（MOI=0.01），37℃吸附 1 小时，换含 2% 血清的维持液，72 小时后通过蚀斑实验测定病毒滴度，或通过免疫荧光检测 N 蛋白评估感染效率。

药物筛选操作：感染前 1 小时加入待筛药物，感染后继续培养 48 小时，通过细胞活力检测排除毒性，同时检测病毒产量，计算药物抑制率与选择指数。

优势：

局限性：