土拨鼠肝细胞
土拨鼠肝细胞相关检测ELISA试剂盒（ELISA法）是一款专为土拨鼠（东方土拨鼠，Marmota monax）肝细胞分泌蛋白、病毒标志物、肝损伤因子及相关细胞因子定量检测设计的高特异性、高灵敏度实验试剂组合，广泛应用于乙型肝炎病毒（HBV）相关机制研究、土拨鼠肝炎病毒（WHV）感染模型研究、肝纤维化、肝细胞癌转化研究、肝脏药物代谢及冬眠期肝脏代谢重塑研究等领域，可实现相关培养上清液、细胞裂解液、血清、血浆及肝脏组织匀浆等各类样本中目标因子含量的精准定量检测。该试剂盒采用双抗体一步夹心法ELISA技术，组分经过严格筛选与优化，针对该类细胞易感染WHV、肝小叶分区代谢特征明显、冬眠期脂质代谢与胆汁酸合成重塑、可分泌ALT/AST/AFP/白蛋白等标志物的细胞特点优化反应体系，能有效规避样本中肝组织碎片、杂蛋白、肝巨噬细胞（库普弗细胞）及其他免疫细胞分泌因子、病毒颗粒等成分的干扰，稳定性强、操作便捷，无需复杂预处理步骤，能精准捕捉样本中微量目标因子的特异性信号，适配低体积样本检测场景，为实验人员提供高效、可靠的检测工具，助力相关实验结果的精准获取与数据分析，本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断，同时可适配原代相关细胞体外培养、WHV感染模型及冬眠期相关细胞代谢诱导后的相关指标检测需求，契合其作为HBV/WHV研究黄金模型细胞的场景，助力肝脏病毒学与代谢机制研究的顺利开展。
检测原理
本试剂盒基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的核心原理，采用双抗体一步夹心法实现对相关目标因子（如WHV表面抗原WHsAg、WHV核心抗原WHcAg、丙an酸转氨酶ALT、天冬氨酸转氨酶AST、甲胎蛋白AFP、白蛋白ALB、肿瘤坏死因子TNF-α、白细胞介素IL-6等）的定性与定量检测，通过特异性免疫反应精准捕获目标蛋白，有效降低样本中肝组织碎片、病毒衣壳蛋白、库普弗细胞因子、脂质颗粒等成分的非特异性干扰，契合该类细胞易感染WHV、代谢分区明确的分泌特性。试剂盒预先将纯化的目标因子捕获抗体包被于酶标微孔板上，形成固相抗体；实验时，向微孔中依次加入待测样本（相关培养上清液、细胞裂解液等）、标准品及HRP标记的目标因子检测抗体，样本中的目标因子会与固相抗体、HRP标记检测抗体特异性结合，形成“抗体-抗原-酶标抗体"夹心复合物；经过充分洗涤去除未结合的游离试剂及样本中的干扰成分后，加入TMB显色底物（部分试剂盒含底物A、B组分），TMB在HRP的催化下转化为蓝色，随后在终止液（2M硫酸）的作用下转化为最终的黄色。该黄色产物的颜色深浅与样本中相关目标因子的含量呈正相关，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），结合标准曲线即可实现对样本中目标因子含量的精准定量，确保检测结果的准确性与科学性，为该类细胞的WHV感染效率、损伤程度、增殖分化及肝脏疾病相关实验提供可靠数据支撑，契合其在HBV/WHV转化医学研究中的核心作用。
产品特点
1. 高灵敏度：检测体系经过相关细胞及WHV标志物检测适配优化，检测限可低至1.0 pg/mL，能精准捕捉微量样本中低浓度的目标因子（如早期WHV感染的WHsAg/WHcAg基础分泌量、冬眠期相关细胞低水平代谢因子），有效避免漏检，适配相关培养上清液、细胞裂解液等低体积、低浓度样本的检测需求，契合该类细胞病毒感染早期标志物微量表达、冬眠期因子分泌动态波动的特性；
2. 特异性强：试剂盒中的捕获抗体与检测抗体均对相关目标因子及WHV特异性抗原具有高度特异性，可有效避免与土拨鼠肝巨噬细胞、肝星状细胞、胆管上皮细胞及样本中杂蛋白、非特异性病毒颗粒发生交叉反应，尤其能精准区分WHsAg与其他嗜肝病毒表面抗原，降低背景信号，提升检测结果的特异性与可靠性，特异性交叉反应率均低于5%，适配WHV感染模型及肝脏复杂样本的特异性检测需求；
3. 操作便捷：组分搭配合理，试剂均为即用型或简单稀释后即可使用，针对相关样本（培养上清、细胞裂解液、肝组织匀浆、血清血浆）优化预处理建议，实验流程简洁，可快速完成加样、孵育、洗涤、显色、检测等操作，全程检测时间约3.5小时，节省实验时间，适配原代相关细胞培养、WHV感染模型及冬眠期样本的后续检测场景，兼顾相关细胞体外培养的实操需求；
4. 稳定性佳：试剂盒各组分均经过严格质量控制，批内变异系数小于10%，批间变异系数小于15%，试剂活性稳定，针对WHV抗原、肝酶及细胞因子的稳定性优化储存条件，能有效保障实验结果的重复性与一致性，具备良好的回收率（85%-115%）与线性稀释特性，适配细胞实验的重复验证需求，契合肝脏病毒学与代谢研究的严谨性要求；
5. 适配性广：可兼容普通酶标仪（450nm波长），适配相关培养上清液、细胞裂解液、血清、血浆（EDTA、肝素抗凝均可）、肝脏组织匀浆及纯化后的WHV病毒抗原样品等多种样本类型，检测范围可覆盖1-200 pg/mL，适用于科研领域各类相关细胞功能研究、WHV感染、肝纤维化、肝癌转化及冬眠代谢相关实验，部分规格可根据需求定制检测范围，同时可适配原代相关细胞体外培养、WHV感染及冬眠期诱导后的常规检测需求，契合其病毒易感性强、代谢可塑性高的特性。
适用样本类型
本试剂盒适用于相关多种微量样本，包括但不限于：相关培养上清液、相关细胞裂解液、血清、血浆（EDTA、肝素抗凝均可）、土拨鼠肝脏组织匀浆及纯化后的WHV抗原样品等。（具体样本处理方法请参考产品说明书），样本处理过程中需注意避免样本降解、污染，避免反复冻融，同时避免使用含NaN₃的样本（NaN₃会抑制HRP活性）；血清/血浆样本需室温放置2小时或4℃过夜析出，4℃1000×g离心20min收集上清，避免溶血样本干扰；相关细胞裂解液需按试剂盒说明书比例用预冷裂解液（含蛋白酶抑制剂+RNA酶抑制剂）制备，裂解后4℃12000×g离心10min收集上清，去除细胞碎片与病毒颗粒聚集体，兼顾其易感染WHV、胞内病毒抗原丰富的特点；肝脏组织匀浆建议按1:9重量体积比用预冷PBS（0.01M，pH=7.4）+蛋白酶抑制剂制备，冰浴匀浆后离心收集上清，去除肝组织碎片、脂质小体；所有样本需离心去除沉淀或悬浮物，保证样本为澄清液体，避免肝组织碎片、病毒衣壳、脂质残留影响检测结果，同时兼顾相关细胞体外培养、WHV感染及冬眠期样本的处理特性，契合其作为WHV天然宿主细胞的样本特点。
储存与注意事项
（一）储存条件
1. 试剂盒未开封时，需于2-8℃冷藏、避光储存，避免冷冻、暴晒及温度剧烈波动，严禁置于高温、潮湿环境，保质期通常为6个月，具体以产品外包装标签为准；结合相关WHV抗原、肝酶及细胞因子的稳定性，严格控制储存温度，避免因子降解，契合其蛋白类标志物易失活、病毒抗原易聚集的特点；
2. 试剂盒开封后，各组分需密封保存，酶标包被板需装入自封袋并加入干燥剂，按说明书要求分别储存（标准品等敏感组分使用后建议分装，于-20℃冷冻储存），HRP标记抗体、TMB底物等需避光保存，避免交叉污染，试剂盒中未使用的组分需及时放回冰箱保存，尤其注意避免抗体试剂反复冻融，防止影响对相关因子及WHV抗原的检测效果，避免因试剂变性导致的检测偏差；
3. 试剂盒各组分开封后建议在规定时间内用完，标准品等液体组分避免反复冻融（最多冻融3次），超过有效期严禁使用；浓缩洗涤液若有结晶析出，稀释时可水浴加温助溶，不影响检测效果；样本收集后需立即处理，相关培养上清液、裂解液样本若1周内不检测，需分装冻存于-20℃或-80℃，冻存样本建议在1-6个月内检测完毕，避免目标因子与病毒抗原降解，同时契合细胞培养样本的短期保存需求，兼顾WHV抗原的稳定性特点。
（二）注意事项
1. 实验前需将试剂盒各组分从冷藏/冷冻环境中取出，在室温（20-25℃）下平衡15-30分钟，避免温度骤变影响试剂活性与检测结果，平衡后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上，自配缓冲液、洗涤液需用pH计测量确保合规（pH值偏差需控制在±0.1），避免pH异常影响抗原抗体结合，保障对相关因子及WHV抗原的精准捕获，契合其病毒抗原与抗体结合对环境pH敏感的特性；
2. 操作过程中需保持实验环境洁净，建议在生物安全二级（BSL-2）超净工作台内进行（尤其处理WHV感染样本），避免灰尘、气溶胶污染试剂及样本，所有操作器具需洁净，配置不同浓度标准品、加样时需更换枪头，避免交叉污染，降低实验误差，尤其注意避免WHV阳性样本污染阴性试剂，同时契合病毒相关细胞实验的无菌与生物安全要求；
3. 微量加样时需选用校准合格的移液器及配套枪头，严格遵循加样规范，加样时将液体加于酶标板孔底部，避免触及孔壁，一次加样时间控制在5分钟内，避免气泡产生与试剂残留，确保加样精准，尤其注意相关培养上清液、WHV感染样本的加样均匀性，避免病毒颗粒聚集体、细胞碎片残留导致的误差，契合其病毒易感性强、胞内成分复杂的特点；
4. 不同批号的试剂盒组分不得混用，也不可与其他厂家试剂盒组分混用；试剂使用前需轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡，防止试剂变性；底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已变蓝的底物液不能使用，终止液加样顺序需与底物加样顺序一致，避免影响显色效果与检测结果，确保对相关因子及WHV抗原含量的精准定量；
5. 洗板时需确保尽量吸干孔内液体，使用自动洗板机可增加30秒浸泡步骤提升精度，避免洗板不彻di
导致结果偏差，尤其需洗净孔内残留的肝组织碎片、病毒颗粒、脂质等干扰成分；温育过程中不要让微孔干燥，需正确使用封板膜；检测前需消除板底残留液体和手指印，避免影响OD值读取，保障实验数据的可靠性，契合相关样本干扰成分较多的特点； 6. 实验过程中需做好个人防护，穿戴手套、口罩、fang'hu'fu（处理WHV感染样本时），避免试剂接触皮肤与黏膜，避免病毒阳性的肝脏组织、细胞样本接触皮肤造成感染；试剂盒液体组分含防腐剂，需避免吸入烟雾；所有样品、洗涤液和实验废弃物需按照BSL-2实验室规范妥善处理，WHV阳性样本需经高压灭菌后再丢弃，同时契合病毒相关细胞实验的安全操作规范，兼顾相关样本的生物安全要求；
7. 严格按照产品说明书的实验流程、试剂用量及孵育条件操作，显色后需在15分钟内完成OD值测定，任何操作偏差都可能导致检测结果失真；实验时建议设置复孔与标准曲线，提升数据可靠性；若样本浓度高于标准品zui高
浓度，需适当稀释后重新测定，稀释过程需遵循规范，确保结果准确，适配相关因子及WHV抗原的微量检测需求，契合其病毒抗原随感染周期动态变化、浓度波动较大的特点。 订购信息
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