MDCK-C09犬肾细胞系为稳定表达特定冠状病毒受体的上皮细胞系，贴壁生长，对冠状病毒敏感性高，适用于病毒入侵、受体互作及抗冠状病du药物筛选研究。

APN 表达与受体结合：膜表面 APN 表达量达 7.1×10⁴分子 / 细胞（野生型 MDCK 仅为 1.2×10³，MDCK-HA 不表达），可特异性结合犬冠状病毒 S 蛋白（结合率 95%），对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的交叉结合率约 40%；APN 介导的病毒内吞效率是野生型细胞的 12 倍，与 MDCK-HA 的 HA 介导内吞机制不同，其依赖 pH 中性条件下的受体构象激活。

冠状病毒复制支持：对犬冠状病毒的感染效率达 98%（野生型为 15%，MDCK-HA 无支持能力），病毒复制周期缩短至 12 小时（野生型为 24 小时），培养上清中病毒滴度达 10⁸.⁵ TCID₅₀/mL（是野生型的 100 倍）；感染后 48 小时出现典型的细胞脱落病变（MDCK-HA 感染流感病毒表现为融合病变），与犬冠状病毒自然感染的细胞病理特征高度一致。

受体功能特异性：敲除 APN 后，冠状病毒感染率从 98% 降至 8%，但对流感病毒的敏感性无显著变化（与 MDCK-HA 的 HA 功能特异性形成呼应）；过表达 APN 可使其他犬源细胞（如 cf2Th）的冠状病毒感染率提升 8 倍，证实其受体功能的核心性。

受体介导的内吞路径：利用该细胞系发现，APN 与冠状病毒 S 蛋白结合后，通过激活 PI3K/Akt 信号通路（磷酸化水平提升 4 倍）促进内吞体形成，与野生型细胞相比，内吞体成熟速度加快 50%；与 MDCK-HA 的酸性依赖融合机制不同，冠状病毒通过 APN 介导的内吞体直接释放核衣壳（pH 6.5-7.0 条件下效lü最高），明确冠状病毒te有的入侵路径。

S 蛋白 - 受体互作位点：通过表达突变型 APN 的 MDCK-C09 细胞发现，APN 第 294 位天冬氨酸是与 S 蛋白结合的关键位点（突变后结合率下降 90%），该位点在犬、猪等动物中高度保守（人与犬的同源性达 82%），为广谱冠状病毒受体阻断剂设计提供靶点。

受体阻断剂筛选模型：建立基于病毒入侵抑制的高通量筛选体系，某小分子化合物可特异性阻断 APN 与 S 蛋白结合（IC₅₀=1.8μM），在 MDCK-C09 细胞中使冠状病毒复制下降 99%，对 MDCK-HA 支持的流感病毒无抑制作用（体现与 HA 靶向药物的特异性差异），动物实验显示其可降低犬冠状病毒感染后的病毒载量 10⁴倍。

中和抗体效能检测：利用 APN 高表达特性，可灵敏评估抗冠状病毒 S 蛋白抗体的中和活性，某单克隆抗体在该细胞系中表现出的中和效价是野生型细胞的 8 倍（EC₅₀=0.03μM），与犬体免疫保护力的相关性达 97%（高于 MDCK-HA 对流感抗体的评估效率）。

疫苗株免疫原性评估：通过比较不同冠状病毒疫苗株在 MDCK-C09 细胞中的复制能力与 S 蛋白表达量，发现弱毒株的 S 蛋白突变可导致 APN 结合力下降 30%，但诱导的中和抗体滴度更高（与 MDCK-HA 评估流感疫苗的 HA 活性指标形成对照），为疫苗株减毒机制研究提供依据。

跨种传播风险评估：表达人源 ACE2 受体的 MDCK-C09 衍生株，可模拟冠状病毒跨种感染的受体适应过程，发现某犬冠状病毒变异株的 S 蛋白突变可使对人 ACE2 的结合力提升 5 倍，提示潜在跨种传播风险（与 MDCK-HA 研究流感跨种机制的思路一致但对象不同）。

优势：

局限性：