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详细介绍
来源与改造机制
形态与生长特征
功能特性
Gal-10 表达与定位:Gal-10 主要定位于细胞外基质与细胞膜表面,表达量较亲本 MARC145 细胞高 12-18 倍(qPCR 与 ELISA 检测),培养液中浓度可达 60ng/mL,通过旁分泌效应增强周围细胞的病毒敏感性。
病毒敏感性:对 PRRSV 的感染效率达 96% 以上(流式细胞术检测病毒 N 蛋白),感染后 20 小时即可检测到病毒复制,48 小时病毒滴度达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL,较 MARC145 细胞高 1.5-2 个数量级;对 PRRSV 的高致病性毒株(如 HP-PRRSV)敏感性突出,检出率达 95%,显著优于其他猴源细胞系。
交叉反应性:对猪圆环病毒 2 型(PCV2)也具有一定敏感性,可支持其低水平复制(滴度 10⁴ TCID₅₀/mL),为 PRRSV 与 PCV2 共感染研究提供模型。
PRRSV 入侵机制研究
病毒吸附与内吞解析:利用 MARC145/Gal-10 的 Gal-10 高表达特性,证实其通过桥接 PRRSV 包膜 GP4 蛋白与宿主细胞表面神经jie苷脂 GM1,促进病毒的网格蛋白介导的内吞作用。通过特异性抗体阻断 Gal-10 后,病毒内吞率下降 80%,明确其为 PRRSV 入侵的关键调节因子。
宿主因子协同作用:该细胞系可用于筛选与 Gal-10 相互作用的宿主蛋白,已鉴定出膜联蛋白 A2(Annexin A2)作为共受体参与病毒内化,为 PRRSV 感染的多分子调控网络研究提供新线索。
PRRSV 疫苗研发与优化
高效疫苗株培养:因病毒复制效率高,可缩短 PRRSV 疫苗株的培养周期,较传统 MARC145 细胞生产工艺提升 40% 产量。例如,在该细胞系中培养的 PRRSV 弱毒疫苗株,病毒滴度稳定在 10⁷.⁵ TCID₅₀/mL,免疫仔猪后产生的中和抗体效价较常规疫苗高 1 个数量级。
新型疫苗载体评估:可作为重组腺病毒载体表达 PRRSV GP5 蛋白的宿主细胞,表达量达 2.5μg/10⁶细胞,免疫小鼠后诱导的细胞免疫应答(IFN-γ 分泌)较 MARC145 细胞高 50%,为载体疫苗研发提供高效表达平台。
抗病du药物筛选与机制验证
靶向 Gal-10 的药物筛选:基于其特性建立高通量筛选模型,已发现天然产物没食子酸乙酯可特异性抑制 Gal-10 的凝集素活性,使 PRRSV 感染率下降 85%,EC₅₀=0.8μM,且对细胞毒性低(CC₅₀>60μM),为新型抗病du药物开发提供先导化合物。
药物协同效应评估:可用于检测不同作用机制药物的协同效果,例如,没食子酸乙酯与利ba韦林联合使用时,对 PRRSV 的抑制率达 95%,协同指数(CI)=0.3,证实二者具有显著协同作用。
基础培养方案
培养基:DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清,pH 维持在 7.2-7.4,可加入 1mM 丙酮酸钠提升细胞代谢效率。
传代流程:当细胞融合度达 80%-90% 时,弃旧培养基,PBS 洗涤 2 次,加入细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟至细胞脱落,加入含血清的培养基终止消化,按 1:4 比例接种至新培养瓶,避免细胞密度过高导致 Gal-10 表达降低。
冻存保护:取对数生长期细胞,用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 5×10⁵个 /mL,程序降温后液氮保存,复苏后传代 2 次,待 Gal-10 表达稳定后用于实验。
病毒感染与检测
PRRSV 接种:细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%,用无血清培养基稀释病毒(MOI=0.05),37℃吸附 1 小时,换含 2% 血清的维持液,48 小时后通过 qPCR 检测病毒 RNA 或间接免疫荧光检测 N 蛋白,计算病毒滴度。
药物筛选操作:感染前 2 小时加入待筛药物,感染后继续培养 48 小时,通过 CCK-8 检测细胞活力,同时检测病毒产量,计算抑制率与选择指数(SI=CC₅₀/EC₅₀)。
优势:
PRRSV 敏感性突出:尤其对高致病性毒株的感染效率与复制能力显著优于同类细胞系,适合烈性 PRRSV 研究。
功能靶向性强:通过 Gal-10 过表达可特异性解析该分子在病毒感染中的作用,实验干扰因素少。
生产效率高:疫苗株培养周期短、产量高,符合工业化生产需求。
局限性:
物种差异影响:猴源 Gal-10 与人、猪源 Gal-10 的同源性分别为 88%、82%,部分研究结果需在猪源细胞中验证。
病毒谱较窄:对非 PRRSV 的敏感性提升有限,应用范围受限于特定病毒研究。
传代依赖性:传代超过 60 代后,Gal-10 表达量下降约 20%,需定期复苏早期冻存细胞。
以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。
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