产品系统PRODUCT CENTER

在发展中求生存,不断完善,以良好信誉和科学的管理促进企业迅速发展
产品系统

首页-产品系统-细胞-细胞系-BY-1394MARC145/Gal-10猴胎肾细胞系

MARC145/Gal-10猴胎肾细胞系
产品型号:BY-1394
简要描述:

MARC145/Gal-10猴胎肾细胞系,MARC145/Gal-10 为表达 Gal-10 的猴胎肾细胞系,上皮样,贴壁生长,对猪繁殖与呼吸综合征病毒敏感,支持高效复制,适用于病毒机制研究及相关疫苗研发。

  • 厂家实力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 质量保障

    Quality Assurance

详细介绍

MARC145/Gal-10猴胎肾细胞系
MARC145/Gal-10猴胎肾细胞系,MARC145/Gal-10 细胞系是在 MARC145 细胞基础上经基因工程改造的猴胎肾上皮细胞模型,因稳定过表达半乳糖凝集素 - 10(Gal-10)、显著增强对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的易感性,成为 PRRSV 机制研究、疫苗研发及抗病du药物筛选的特色工具。其保留亲本细胞的生物学特性,同时通过 Gal-10 的功能优化,为解析病毒与宿主互作提供了精准实验体系。
一、细胞起源与生物学特性
  1. 来源与改造机制

MARC145 细胞源自 MA104 细胞的克隆株,而 MARC145/Gal-10 通过慢病毒载体介导,将人源 Gal-10 基因整合至 MARC145 基因组构建而成(“Gal-10" 代表过表达的半乳糖凝集素 - 10)。Gal-10 是一种具有凝集素活性的分泌型蛋白,可通过识别 PRRSV 包膜糖蛋白的糖基化位点与宿主细胞表面糖脂的相互作用,促进病毒内吞过程,使感染效率较亲本细胞提升 4-6 倍。
  1. 形态与生长特征

细胞呈典型上皮样形态,贴壁生长时呈多边形,排列紧密如铺路石状,胞质内可见散在颗粒,核仁明显。在 37℃、5% CO₂条件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基,倍增时间约 32-40 小时,传代比例 1:3 至 1:5,每周换液 2-3 次以维持细胞密度在 2×10⁴-7×10⁴个 /cm²。细胞冻存复苏存活率超 85%,连续传代 50 次后 Gal-10 表达量无显著衰减(Western blot 检测),遗传稳定性优于瞬时表达系统。
  1. 功能特性

  • Gal-10 表达与定位:Gal-10 主要定位于细胞外基质与细胞膜表面,表达量较亲本 MARC145 细胞高 12-18 倍(qPCR 与 ELISA 检测),培养液中浓度可达 60ng/mL,通过旁分泌效应增强周围细胞的病毒敏感性。

  • 病毒敏感性:对 PRRSV 的感染效率达 96% 以上(流式细胞术检测病毒 N 蛋白),感染后 20 小时即可检测到病毒复制,48 小时病毒滴度达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL,较 MARC145 细胞高 1.5-2 个数量级;对 PRRSV 的高致病性毒株(如 HP-PRRSV)敏感性突出,检出率达 95%,显著优于其他猴源细胞系。

  • 交叉反应性:对猪圆环病毒 2 型(PCV2)也具有一定敏感性,可支持其低水平复制(滴度 10⁴ TCID₅₀/mL),为 PRRSV 与 PCV2 共感染研究提供模型。

二、核心应用领域
  1. PRRSV 入侵机制研究

  • 病毒吸附与内吞解析:利用 MARC145/Gal-10 的 Gal-10 高表达特性,证实其通过桥接 PRRSV 包膜 GP4 蛋白与宿主细胞表面神经jie苷脂 GM1,促进病毒的网格蛋白介导的内吞作用。通过特异性抗体阻断 Gal-10 后,病毒内吞率下降 80%,明确其为 PRRSV 入侵的关键调节因子。

  • 宿主因子协同作用:该细胞系可用于筛选与 Gal-10 相互作用的宿主蛋白,已鉴定出膜联蛋白 A2(Annexin A2)作为共受体参与病毒内化,为 PRRSV 感染的多分子调控网络研究提供新线索。

  1. PRRSV 疫苗研发与优化

  • 高效疫苗株培养:因病毒复制效率高,可缩短 PRRSV 疫苗株的培养周期,较传统 MARC145 细胞生产工艺提升 40% 产量。例如,在该细胞系中培养的 PRRSV 弱毒疫苗株,病毒滴度稳定在 10⁷.⁵ TCID₅₀/mL,免疫仔猪后产生的中和抗体效价较常规疫苗高 1 个数量级。

  • 新型疫苗载体评估:可作为重组腺病毒载体表达 PRRSV GP5 蛋白的宿主细胞,表达量达 2.5μg/10⁶细胞,免疫小鼠后诱导的细胞免疫应答(IFN-γ 分泌)较 MARC145 细胞高 50%,为载体疫苗研发提供高效表达平台。

  1. 抗病du药物筛选与机制验证

  • 靶向 Gal-10 的药物筛选:基于其特性建立高通量筛选模型,已发现天然产物没食子酸乙酯可特异性抑制 Gal-10 的凝集素活性,使 PRRSV 感染率下降 85%,EC₅₀=0.8μM,且对细胞毒性低(CC₅₀>60μM),为新型抗病du药物开发提供先导化合物。

  • 药物协同效应评估:可用于检测不同作用机制药物的协同效果,例如,没食子酸乙酯与利ba韦林联合使用时,对 PRRSV 的抑制率达 95%,协同指数(CI)=0.3,证实二者具有显著协同作用。

三、培养与实验操作要点
  1. 基础培养方案

  • 培养基:DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清,pH 维持在 7.2-7.4,可加入 1mM 丙酮酸钠提升细胞代谢效率。

  • 传代流程:当细胞融合度达 80%-90% 时,弃旧培养基,PBS 洗涤 2 次,加入细胞解离液,37℃孵育 2-3 分钟至细胞脱落,加入含血清的培养基终止消化,按 1:4 比例接种至新培养瓶,避免细胞密度过高导致 Gal-10 表达降低。

  • 冻存保护:取对数生长期细胞,用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 5×10⁵个 /mL,程序降温后液氮保存,复苏后传代 2 次,待 Gal-10 表达稳定后用于实验。

  1. 病毒感染与检测

  • PRRSV 接种:细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,培养 24 小时至融合度 70%,用无血清培养基稀释病毒(MOI=0.05),37℃吸附 1 小时,换含 2% 血清的维持液,48 小时后通过 qPCR 检测病毒 RNA 或间接免疫荧光检测 N 蛋白,计算病毒滴度。

  • 药物筛选操作:感染前 2 小时加入待筛药物,感染后继续培养 48 小时,通过 CCK-8 检测细胞活力,同时检测病毒产量,计算抑制率与选择指数(SI=CC₅₀/EC₅₀)。

四、优势与局限性
  • 优势

  1. PRRSV 敏感性突出:尤其对高致病性毒株的感染效率与复制能力显著优于同类细胞系,适合烈性 PRRSV 研究。

  1. 功能靶向性强:通过 Gal-10 过表达可特异性解析该分子在病毒感染中的作用,实验干扰因素少。

  1. 生产效率高:疫苗株培养周期短、产量高,符合工业化生产需求。

  • 局限性

  1. 物种差异影响:猴源 Gal-10 与人、猪源 Gal-10 的同源性分别为 88%、82%,部分研究结果需在猪源细胞中验证。

  1. 病毒谱较窄:对非 PRRSV 的敏感性提升有限,应用范围受限于特定病毒研究。

  1. 传代依赖性:传代超过 60 代后,Gal-10 表达量下降约 20%,需定期复苏早期冻存细胞。

五、研究意义与展望
MARC145/Gal-10 细胞系的构建为 PRRSV 研究提供了特异性工具,其对高致病性毒株的高效支持能力,为烈性 PRRSV 的防控研究提供了关键模型。在应用层面,其提升了疫苗生产效率与药物筛选精准度,推动了 PRRSV 防控技术的革新。未来,通过基因编辑技术进一步整合猪源受体分子(如 CD163),有望构建更接近猪体内环境的 “人源化" 细胞模型,加速研究成果向临床转化,同时为其他动物病毒的细胞模型构建提供借鉴。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

相关产品

扫一扫
添加微信

扫一扫
手机浏览

Copyright©2025  上海乾思生物科技有限公司  版权所有    备案号:沪ICP备2023041625号-7    sitemap.xml    技术支持:化工仪器网    管理登陆

TEL:021-34556080