如何进行普通简单的细胞培养

就乾思生物科技列举的五个必需：培养基、血清、无菌无毒环境、恒定生长温度以及合适气体的环境是非常重要的，必须要注意的地方。

前期需要做好准备工作，包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁和消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。设施，器材就有超净台，倒置显微镜，离心机，压力蒸汽消毒器等，以及各种的玻璃器材，塑料器材，橡皮器材和金属器材。

具体步骤如下：

一、复苏

1、把冻存管从液氮中取出来，立即投入37度水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放在超净工作台里。

2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

2.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5.zui后3天换一次培养基。

二、传代（传代动物细胞）

1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

2.把原有培养基吸掉。

3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。

4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

5.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

6.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

三、冻存

1、把细胞消化下来并离心（同上）。

2、用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟。

3、写明细胞种类，冻存日期。（4℃--30min，-20℃--30min，-80℃。）

（冻存液的配制：70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。）

需要注意的事项：

实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液五倍含量的请链霉素。

用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。

培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。

目前，细胞培养的目的和用途主要科学研究及生物制药，它的耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。所以希望未来，我们的生物科技越来越好，共同走向美好的明天！